[发明专利]一种重组肌肽水解酶突变体及其应用有效
| 申请号： | 202011182797.3 | 申请日： | 2020-10-29 |
| 公开（公告）号： | CN112266908B | 公开（公告）日： | 2022-11-08 |
| 发明（设计）人： | 潘江;许建和;殷东亚;钱小龙 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学;苏州百福安酶技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/48 | 分类号： | C12N9/48;C12N15/57;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 褚明伟 |
| 地址： | 200237 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 水解 突变体 及其 应用 | ||
1.一种重组肌肽水解酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列选自如下中的一种：
(1)将如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第301位缬氨酸替换为苏氨酸；
(2)将如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第97位丙氨酸替换为异亮氨酸，第275位丙氨酸替换为酪氨酸；第301位缬氨酸替换为色氨酸。
2.一种分离的核酸，其特征在于，所述的核酸编码如权利要求1所述重组肌肽水解酶突变体。
3.一种重组表达载体，其特征在于，包含如权利要求2所述的核酸。
4.一种重组表达转化体，其特征在于，包含如权利要求3所述的重组表达载体。
5.一种重组肌肽水解酶突变体催化剂，其特征在于，是以下形式中的任意一种：
(1) 培养如权利要求4所述重组表达转化体，分离含有如权利要求1所述重组肌肽水解酶突变体的转化体细胞；
(2) 培养如权利要求4所述重组表达转化体，分离含有如权利要求1所述重组肌肽水解酶突变体的粗酶液；
(3) 培养如权利要求4所述重组表达转化体，分离含有如权利要求1所述重组肌肽水解酶突变体的粗酶液，将粗酶液冷冻干燥得到的粗酶粉。
6.一种如权利要求1所述重组肌肽水解酶突变体或如权利要求5所述重组肌肽水解酶突变体催化剂在合成L-肌肽中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，使用如权利要求1所述重组肌肽水解酶突变体或如权利要求5所述重组肌肽水解酶突变体催化剂催化β-丙氨酸和L-组氨酸的逆水解反应生成L-肌肽，然后分离产物L-肌肽。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述L-组氨酸为L-组氨酸盐酸盐。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，反应pH为5.5-9.0，底物β-丙氨酸的浓度为200 mM-饱和浓度，底物L-组氨酸的浓度为100 mM-饱和浓度。
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