[发明专利]一种非小细胞肺癌中PD-L1阳性肿瘤细胞比例的分析方法和存储设备

权利要求书

1.一种非小细胞肺癌中PD-L1阳性肿瘤细胞比例的分析方法，其特征在于，包括步骤：

获取待染色切片；

对部分待染色切片进行肿瘤细胞标志物免疫组化染色操作；

对部分待染色切片进行特定标志物免疫组化染色操作；

获取肿瘤细胞标志物免疫组化染色后的染色切片的第一感兴趣区域，获取所述第一感兴趣区域内的特征点，根据所述第一感兴趣区域内的特征点的数量计算肿瘤细胞总数；

根据所述第一感兴趣区域位置获取特定标志物免疫组化染色后的染色切片的第二感兴趣区域，获取所述第二感兴趣区域内的特征点，根据所述第二感兴趣区域内的特征点计算特定标志物染色的肿瘤细胞数量；

根据所述肿瘤细胞总数和所述特定标志物染色的肿瘤细胞数量计算得肿瘤细胞阳性比例分数；

所述“对部分待染色切片进行肿瘤细胞标志物免疫组化染色操作”，还包括步骤：

甩干待染色切片，滴加适当比例稀释的cocktail混合型一抗，25℃孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的DAB显色液显色3-10分钟，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，按照85%-95%-100%-100%的酒精梯度依次脱水，每个比例脱水的时间均为三分钟，最后二甲苯透明3分钟，中性树胶封片，抗体定位于肿瘤细胞膜上，并呈棕黄色染色，细胞核经苏木素复染后呈蓝色；

所述“对部分待染色切片进行特定标志物免疫组化染色操作”，还包括步骤：

甩干切片，滴加适当比例稀释的一抗PD-L1，25℃孵育1小时，PBS冲洗3×3分钟，滴加二抗室温孵育15-30分钟，PBS冲洗3×3分钟，甩去PBS，用新鲜配置的DAB显色液显色3-10分钟，苏木素复染25秒，PBS返蓝30秒，按照85%-95%-100%-100%的酒精梯度依次脱水，每个比例脱水的时间均为三分钟，最后二甲苯透明3分钟，中性树胶封片，PD-L1抗体定位于肿瘤细胞和免疫细胞的细胞膜上，并呈棕黄色染色，细胞核经苏木素复染后呈蓝色。

2.根据权利要求1所述的一种非小细胞肺癌中PD-L1阳性肿瘤细胞比例的分析方法，其特征在于，所述“获取肿瘤细胞标志物免疫组化染色后的染色切片的第一感兴趣区域”，还包括步骤：

以预设颜色为感兴趣特征提取第一感兴趣区域，所述预设颜色包括但不限于：棕黄色；

所述“获取所述第一感兴趣区域内的特征点”，还包括步骤：

以所述第一感兴趣区域内的蓝色点为特征点。

3.根据权利要求1所述的一种非小细胞肺癌中PD-L1阳性肿瘤细胞比例的分析方法，其特征在于，所述“获取所述第二感兴趣区域内的特征点”，还包括步骤：

以所述第二感兴趣区域内的棕黄色点和蓝色点为特征点。

4.根据权利要求1所述的一种非小细胞肺癌中PD-L1阳性肿瘤细胞比例的分析方法，其特征在于，所述“获取待染色切片”，还包括步骤：

取预设次数例癌组织蜡块修片后进行连续切片，厚度定为3μm，将连续切片漂在凉水中, 让其自然展开，再将分开的切片转移到45 ℃的温水中展片30秒，按切片顺序用经多聚赖氨酸处理过的载玻片裱贴切片，将制成的组织芯片放入65 ℃烤箱内烤片2小时，取出室温冷却，放入- 4℃ 冰箱保存。

5.根据权利要求1所述的一种非小细胞肺癌中PD-L1阳性肿瘤细胞比例的分析方法，其特征在于，所述“根据所述肿瘤细胞总数和所述特定标志物染色的肿瘤细胞数量计算得肿瘤细胞阳性比例分数”，还包括步骤：

肿瘤细胞阳性比例分数=（（任何强度PD-L1免疫组化标志物染色的肿瘤细胞数量）/肿瘤细胞总数）*100% 。

6.根据权利要求1所述的一种非小细胞肺癌中PD-L1阳性肿瘤细胞比例的分析方法，其特征在于，所述“根据所述第一感兴趣区域位置获取特定标志物免疫组化染色后的染色切片的第二感兴趣区域”，还包括步骤：

所述第一感兴趣区域在切片上的位置与所述第二感兴趣区域在切片上的位置相同。