[发明专利]一种检测5-羟甲基胞嘧啶的化学发光生物传感器及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种检测5-羟甲基胞嘧啶的化学发光生物传感器，其特征在于，所述化学发光生物传感器包括糖基化模块、高碘酸盐氧化模块、生物素化模块、末端转移酶辅助等温扩增模块和化学发光检测模块；

所述糖基化模块包括T4噬菌体β-葡糖基转移酶、尿苷二磷酸葡萄糖和NEBuffer 4；

所述高碘酸盐氧化模块包括高碘酸钠、磷酸钠和亚硫酸钠；

所述生物素化模块包括醛基反应探针；

所述末端转移酶辅助等温扩增模块包括末端转移酶、脱氧鸟苷三磷酸和脱氧腺苷三磷酸；

所述化学发光检测模块包括氯高铁血红素、鲁米诺溶液和双氧水。

2.权利要求1所述化学发光生物传感器在检测5-羟甲基胞嘧啶中的应用。

3.一种5-羟甲基胞嘧啶的化学发光检测方法，其特征在于，所述方法包括对基因组DNA样品依次进行糖基化、高碘酸盐氧化、生物素化处理后，加入链霉亲和素包被的磁珠进行富集，磁分离后，富集生物素化的DNA在末端转移酶辅助等温扩增策略下产生大量的长链富G序列，然后加入氯高铁血红素形成hemin-G四链纳米结构，该结构催化H₂O₂介导的鲁米诺氧化，产生化学发光信号。

4.如权利要求3所述的化学发光检测方法，其特征在于，所述糖基化处理具体为：将基因组DNA样品、尿苷二磷酸葡萄糖和T4噬菌体β-葡糖基转移酶在NEBuffer 4中进行孵育反应。

5.如权利要求4所述的化学发光检测方法，其特征在于，所述孵育反应具体条件为：在35-40℃反应1-3 h。

6.如权利要求4所述的化学发光检测方法，其特征在于，所述孵育反应具体条件为：在37℃反应2h。

7.如权利要求4所述的化学发光检测方法，其特征在于，采用QIAquick核苷酸切除净化柱去除未反应的核苷酸和离子。

8.如权利要求4所述的化学发光检测方法，其特征在于，所述高碘酸盐氧化处理具体为：将经糖基化处理后的样品在高碘酸钠和磷酸钠体系中反应，然后再与亚硫酸钠反应。

9.如权利要求8所述的化学发光检测方法，其特征在于，在高碘酸钠和磷酸钠体系中反应具体条件为：20-25℃反应10-20 h；与亚硫酸钠反应具体条件为：在室温下反应5-20分钟。

10.权利要求8所述的化学发光检测方法，其特征在于，在高碘酸钠和磷酸钠体系中反应具体条件为：22℃反应16h。

11.权利要求8所述的化学发光检测方法，其特征在于，与亚硫酸钠反应具体条件为：在室温下反应10分钟。

12.如权利要求8所述的化学发光检测方法，其特征在于，采用QIAquick核苷酸切除净化柱去除盐离子。

13.如权利要求4所述的化学发光检测方法，其特征在于，所述生物素化处理具体为：将经高碘酸盐氧化处理后的样品与醛基反应探针混合孵育。

14.如权利要求13所述的化学发光检测方法，其特征在于，混合孵育反应具体条件为：在35-40℃反应0.5-2 h。

15.如权利要求13所述的化学发光检测方法，其特征在于，混合孵育反应具体条件为：在37℃反应1h。

16.如权利要求13所述的化学发光检测方法，其特征在于，采用QIAquick核苷酸去除纯化柱去除多余的醛基反应探针。