[发明专利]一种检测红色毛癣菌的试纸条、试剂盒及试纸条的制备方法有效
申请号: | 202011198310.0 | 申请日: | 2020-10-31 |
公开(公告)号: | CN112014565B | 公开(公告)日: | 2021-02-12 |
发明(设计)人: | 张树文;刘光明;黄翔;孙娈燕 | 申请(专利权)人: | 南京黎明生物制品有限公司;中国医学科学院皮肤病医院(中国医学科学院皮肤病研究所) |
主分类号: | G01N33/58 | 分类号: | G01N33/58;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532 |
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地址: | 210000 江苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 检测 红色 毛癣菌 试纸 试剂盒 制备 方法 | ||
1.一种检测红色毛癣菌的试纸条,包括底板(5)以及在底板(5)上依次搭接的样品垫(1)、标记物垫(2)、反应垫(3)和吸水垫(4),其特征在于:所述标记物垫(2)包被有采用不同颜色乳胶颗粒标记的抗生物素抗体和针对红色毛癣菌菌体细胞壁上几丁质的特异性抗体二;所述反应垫(3)上形成检测区(6)和质控区(7),所述检测区(6)包被有针对红色毛癣菌菌体细胞壁上几丁质的特异性抗体一,所述质控区(7)包被有生物素牛血清白蛋白;
所述检测红色毛癣菌的试纸条的制备方法,包括以下步骤:
a.采用不同颜色的乳胶颗粒标记抗体:
S1:用PBS溶液将两种颜色的乳胶颗粒分别稀释,两种乳胶颗粒稀释后的终浓度均控制在0.5-5体积%;
S2:向稀释后的乳胶颗粒中分别加入抗生物素抗体和针对红色毛癣菌菌体细胞壁上几丁质的特异性抗体二,两种抗体的终浓度均控制在0.1-0.5mg/mL,0-4℃反应过夜;
S3:向步骤aS2获得的两种乳胶-抗体结合物中分别加入终浓度为0.5-5体积%的BSA封闭0.5-4h;
S4:将步骤aS3封闭处理后的两种结合物分别进行离心,去上清,将离心获得的两种沉淀均用含0.1-1体积% BSA的PBS溶液复溶,得到两种乳胶-抗体结合物;
b. 点膜:
S1:用PBS溶液分别稀释生物素牛血清白蛋白和针对红色毛癣菌菌体细胞壁上几丁质的特异性抗体一,二者稀释后的浓度均控制在1-4mg/mL;
S2:将步骤bS1稀释后的生物素牛血清白蛋白点接在反应垫(3)的质控区(7),将步骤bS1稀释后的针对红色毛癣菌菌体细胞壁上几丁质的特异性抗体一点接在反应垫(3)的检测区(6),烘干后得到点膜后的反应垫(3);
c. 点乳胶:
S1:将步骤a中获得的两种乳胶-抗体结合物混合并用含0.1-0.5体积% BSA的PBS溶液进行稀释,稀释后两种乳胶-抗体结合物的终浓度均控制在0.3-0.5体积%;
S2:将步骤cS1获得的含有两种乳胶-抗体结合物的混合物喷点在标记物垫(2)上,烘干后得到点乳胶后的标记物垫(2);
d.组装:将样品垫(1)、步骤c获得的标记物垫(2)、步骤b获得的反应垫(3)和吸水垫(4)依次搭接并固定在底板(5)上,获得检测红色毛癣菌的试纸条。
2.根据权利要求1所述的一种检测红色毛癣菌的试纸条,其特征在于:所述抗生物素抗体选用蓝色乳胶颗粒标记;所述针对红色毛癣菌菌体细胞壁上几丁质的特异性抗体二选用红色乳胶颗粒标记。
3.根据权利要求1所述的一种检测红色毛癣菌的试纸条,其特征在于:所述乳胶颗粒的直径为200-500nm。
4.根据权利要求1所述的一种检测红色毛癣菌的试纸条,其特征在于:所述样品垫(1)选用玻璃纤维材料制成。
5.根据权利要求1所述的一种检测红色毛癣菌的试纸条,其特征在于:所述标记物垫(2)选用聚酯膜材料制成。
6.根据权利要求1所述的一种检测红色毛癣菌的试纸条,其特征在于:所述反应垫(3)选用硝酸纤维素膜材料制成。
7.根据权利要求1所述的一种检测红色毛癣菌的试纸条,其特征在于:所述底板(5)选用聚苯乙烯材料制成。
8.根据权利要求1所述的一种检测红色毛癣菌的试纸条,其特征在于:步骤bS2和步骤cS2中,烘干条件为25-45℃烘干1-4小时。
9.一种检测红色毛癣菌的试剂盒,其特征在于:包括权利要求1-8任一所述的检测红色毛癣菌的试纸条。
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