[发明专利]一种海洋微藻脂肪酸的提取检测方法

权利要求书

1.一种海洋微藻脂肪酸的提取检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)微藻的收集和破碎；

取已培养好的微藻，将样品放入液氮中冷冻，解冻后对样品进行离心，离心后收集细胞，然后利用破碎仪对细胞进行超声处理，取体积比为3：2至2：1的氯仿、甲醇萃取脂质，然后在室温下离心，提取疏水相为脂质提取物，在脂质提取物中加入质量比大于等于0.01％的丁基化羟基甲苯；

(2)分离中性和极性脂质；

将脂质提取物蒸发至干燥并用体积比为95:5至98:2的氯仿、甲醇洗涤后回收，将脂质提取物沉积在填充硅胶的固相萃取柱上，用体积比为95:5至98:2的氯仿、甲醇洗脱中性脂质，然后用甲醇洗脱极性脂质；

(3)脂质脂肪酸分析；

收集后的极性脂质和中性脂质在干燥机中干燥，在每一组分中加入甲醇和三氟化硼混合溶液作为催化剂、十九烷酸甲酯，在90-100℃下酯交换8-10min，冷却后加入正己烷，将有机相的脂肪酸甲酯用蒸馏水定容到1.5-2.0mL，回收脂肪酸甲酯后收集到气相瓶中待测；

(4)利用GC-MS对脂肪酸甲酯进行检测。

2.根据权利要求1所述的一种海洋微藻脂肪酸的提取检测方法，其特征在于，在所述步骤(1)中，取出已培养好的微藻为对数增长末期的微藻。

3.根据权利要求1所述的一种海洋微藻脂肪酸的提取检测方法，其特征在于，在所述步骤(4)中，在气相色谱中分析FAME，GC-MS检测条件为：

GC模块：

1)柱箱温度：70℃；

2)进样口温度：260℃；

3)进样方式：不分流；

4)进样时间：1min；

5)载气：He；

6)压力：61.5Pa；

7)总流量14.0mL/min；

8)柱流量：1mL/min；

9)进样体积：1微升；

10)柱箱升温程序：70℃保持1min，以8℃/min上升到170℃保持6分钟，以4℃/min上升到280℃保持5min；

MS模块：

1)溶剂延迟时间3min；

2)扫描范围45-500m/z；

3)扫描速度：0.2scan/s。

4.根据权利要求1所述的一种海洋微藻脂肪酸的提取检测方法，其特征在于，在所述步骤(1)中，氯仿与甲醇萃取脂质的体积比为2：1。

5.根据权利要求1所述的一种海洋微藻脂肪酸的提取检测方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，甲醇的质量为催化剂质量的14％。

6.根据权利要求1所述的一种海洋微藻脂肪酸的提取检测方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，氯仿与甲醇的体积比为98:2。

7.根据权利要求1所述的一种海洋微藻脂肪酸的提取检测方法，其特征在于，在所述步骤(1)中，利用细胞破碎仪对细胞进行超声处理的时间为25-30min；离心的转速为在10000-12000rpm，离心的时间为8-10min。

8.根据权利要求1所述的一种海洋微藻脂肪酸的提取检测方法，其特征在于，在所述步骤(1)中，在-20℃的条件下，在脂质提取物中加入丁基化羟基甲苯。

9.根据权利要求1所述的一种海洋微藻脂肪酸的提取检测方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述填充硅胶的目数为63-230。

10.根据权利要求1所述的一种海洋微藻脂肪酸的提取检测方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，干燥时间为2-4h。