[发明专利]一种高效纯化分离抗体的方法

说明书

本发明公开了一种高效纯化分离抗体的方法：制备异形纤维；将异形纤维进行分散制得分散液并转移至反应器内，滴加硅源、正丁醇以及稀盐酸的混合液，搅拌水解处理，继续加入3‑缩水甘油基氧基丙基三甲氧基硅烷、无水乙醇，氮气气氛下继续搅拌反应，反应后过滤、干燥制得改性异形纤维填料；将改性异形纤维填料分散在去离子水中制得悬浮液，将悬浮液转移至层析柱内，干燥，制得改性层析柱；采用缓冲溶液对改性层析柱进行平衡预处理，将待纯化抗体溶液加载到层析柱内，采用缓冲溶液对层析柱进行洗涤，采用洗脱液对洗涤后的层析柱进行洗脱，并收集洗脱液；洗脱后的层析柱进行后处理再重复利用。该方法操作简单，成本低，得到的抗体纯度高。

技术领域：

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种高效纯化分离抗体的方法。

背景技术：

抗体是一种由浆细胞在抗原的刺激下分泌的并能与抗原特异性结合的免疫球蛋白。抗体分为五类:IgG、IgM、IgA、IgD和IgE，其中IgG含量最高，是免疫的主要抗体。每一种相对应的抗原和抗体都会因为它们之间特定的亲和力而结合，正是这种抗体-抗原的特异性结合的机理为抗体在生物技术领域和医学领域的广泛应用提供了基础。随着自然环境的恶化，人们生活习惯的改变和人口的老龄化，肿瘤的发病率和死亡率不断上升，肿瘤已经成为威胁人们生命的主要恶性疾病[4]。抗体药物具有比较低的毒副作用，同时具有比较强的靶向性和较高的特异性，在治疗肿瘤领域越来越受到人们的青睐。

用于医疗目的的抗体必须具有较高的纯度，使抗体的纯化成本大大增加，现应用最广泛的蛋白纯化分离技术是亲和层析法。亲和层析法是利用生物活性物质之间的特异性亲和力，以达到分离纯化目标产物目的的蛋白纯化方法。专利CN201811332123.X公开了一种蛋白A亲和层析法纯化抗体的方法以及抗体的纯化方法。蛋白A亲和层析法纯化抗体的方法：循环利用以下蛋白A亲和层析柱纯化目标抗体：填料为MabSelect LX、Amsphere A3或Praesto Jetted A50，柱高为5～15cm，线性流速为200～500cm/h；在用洗脱液洗脱目标抗体之前，先用pH值为5～6，电导率为20～100mS/cm的缓冲液洗涤柱床。专利CN201811226606.1提供了一种抗体的纯化方法、抗体和应用，涉及蛋白纯化的技术领域。该纯化方法包括：提供含有抗体粗品的细胞发酵液；提供用于层析的缓冲液；然后使用AKTAAvant 150对抗体粗品进行组合层析；其中组合层析依次包括(a)亲和层析以捕获抗体；(b)凝胶过滤层析置换Buffer以脱盐；(c)再次层析分离抗体以对抗体进行精纯处理。由上述现有技术可知，采用蛋白亲和层析法来纯化抗体，虽然可以得到高纯度的抗体，但是成本较大，且吸附填料的重复利用性较低。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是，针对现有技术的不足，提供一种高效纯化分离抗体的方法。本发明首先采用制备高比表面积的异形纤维，然后在其表面涂覆二氧化硅涂层，来改善其机械性能和吸附性能，最后在二氧化硅涂层表面进行官能化处理，来提高材料与抗体的结合性能，从而达到对抗体纯化的目的。该方法操作简单，成本低，得到的抗体纯度高。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种高效纯化分离抗体的方法，包括以下步骤：

(1)将聚酰胺切片并由双螺杆挤出造粒，将制得的粒料经由纺丝机上的星型喷丝板挤出纺丝，制得异形纤维；

(2)将上述制得的异形纤维进行分散制得质量浓度为5-8％的分散液，将分散液转移至反应器内，滴加硅源、正丁醇以及稀盐酸的混合液，搅拌水解处理，继续加入3-缩水甘油基氧基丙基三甲氧基硅烷、无水乙醇，氮气气氛下继续搅拌反应，反应结束后，过滤，将过滤得到的沉淀干燥制得改性异形纤维填料；

(3)将上述制得的改性异形纤维填料分散在去离子水中制得质量浓度为0.15-0.25％的悬浮液，然后将悬浮液转移至层析柱内，然后干燥，制得改性异形纤维柱；