[发明专利]一种利用角质酶促进蛋白在枯草芽孢杆菌中胞外表达的方法

权利要求书

1.一种角质酶突变体，其特征在于，所述角质酶突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的角质酶的第214位的氨基酸突变为丙氨酸得到的；

或，所述角质酶突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的角质酶的第213位和第214位氨基酸同时突变为丙氨酸得到的。

2.编码权利要求所述突变体的基因。

3.携带权利要求2所述基因的载体。

4.携带权利要求2所述基因，或权利要求3所述载体的重组细胞。

5.一种重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，共表达了权利要求1所述的角质酶突变体与胞内蛋白。

6.根据权利要求5所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述胞内蛋白包括但不限于木糖异构酶、4,6-α-葡萄糖基转移酶、4-α-糖基转移酶、海藻糖合酶和分支酶。

7.根据权利要求6所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述重组枯草芽孢杆菌以枯草芽孢杆菌WS5、枯草芽孢杆菌168、枯草芽孢杆菌W600、枯草芽孢杆菌W800、枯草芽孢杆菌RIK1285中的任一为表达宿主；

8.根据权利要求7所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述重组枯草芽孢杆菌以pHY300PLK、PUB110、pBE-S、pWB980中的任一为表达载体。

9.权利要求1所述的突变体，或权利要求3所述的基因，或权利要求4所述的载体在促进枯草芽孢杆菌将重组胞内酶在胞外表达的中应用。

10.一种生产胞外蛋白的方法，其特征在于，将权利要求5～8任一所述的重组枯草芽孢杆菌接种至种子培养基中，得到种子液；将种子液接种至发酵培养基中进行发酵，得到发酵液；将发酵液离心，收集发酵上清液。

11.权利要求1所述的突变体，或权利要求3所述的基因，或权利要求4所述的载体，或权利要求5所述的重组细胞，或权利要求6～8任一所述的重组枯草芽孢杆菌在发酵产酶或参与酶解催化反应方面的应用。