[发明专利]复合酶及其在制备麦角硫因中的应用

权利要求书

1.复合酶，其由：L-组氨酸甲基化酶、卤素甲基转移酶和三甲基组氨酸硫化酶组成，

所述L-组氨酸甲基化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或2所示，

所述卤素甲基转移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:3或4所示，

所述三甲基组氨酸硫化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:5或6所示。

2.权利要求1所述的复合酶在麦角硫因酶催化制备中的应用。

3.麦角硫因的酶催化制备方法，其特征在于，包括：

L-组氨酸经L-组氨酸甲基化酶、卤素甲基转移酶催化，获得三甲基组氨酸；然后经三甲基组氨酸硫化酶催化获得麦角硫因；

所述L-组氨酸甲基化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或2所示，

所述卤素甲基转移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:3或4所示，

所述三甲基组氨酸硫化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:5或6所示。

4.根据权利要求3所述的酶催化制备方法，其特征在于，其中三甲基组氨酸的制备方法包括：

在缓冲液中加入L-组氨酸、腺苷蛋氨酸、L-组氨酸甲基化酶和卤素甲基转移酶，然后滴加碘甲烷，pH7.0~9.0搅拌反应制得三甲基组氨酸。

5.根据权利要求4所述的酶催化制备方法，其特征在于，

所述缓冲液为100mmol/L pH值为8.0的磷酸缓冲液；

所述加入至L-组氨酸浓度为100 mmol/L ~200mmol/L；腺苷蛋氨酸浓度为0.8 mmol/L~1.2 mmol/L；L-组氨酸甲基化酶的浓度为500 U/L ~1000U/L；卤素甲基转移酶的浓度为800 U/L ~1500U/L；

所述滴加碘甲烷与腺苷蛋氨酸的摩尔比为（360~720）:1。

6.根据权利要求3所述的酶催化制备方法，其特征在于，所述三甲基组氨酸硫化酶催化获得麦角硫因包括：加入三甲基组氨酸硫化酶和聚硫化钾，N₂环境反应获得麦角硫因。

7.根据权利要求6所述的酶催化制备方法，其特征在于，所述加入三甲基组氨酸硫化酶至浓度为600 U/L ~800 U/L，加入聚硫化钾的量为三甲基组氨酸的两倍当量。

8.根据权利要求3~7任一项所述的酶催化制备方法，其特征在于，

所述L-组氨酸甲基化酶的制备方法包括：将编码L-组氨酸甲基化酶的核酸转化入敲除S-腺苷同型半胱氨酸核苷水解酶mtnN基因的宿主，经诱导表达获得含有L-组氨酸甲基化酶的菌液；

所述卤素甲基转移酶的制备方法包括：将编码卤素甲基转移酶的核酸转化入敲除S-腺苷同型半胱氨酸核苷水解酶mtnN基因的宿主，经诱导表达获得含有卤素甲基转移酶的菌液；

所述三甲基组氨酸硫化酶的制备方法包括：将编码三甲基组氨酸硫化酶的核酸转化入敲除S-腺苷同型半胱氨酸核苷水解酶mtnN基因的宿主，经诱导表达获得含有三甲基组氨酸硫化酶的菌液。