[发明专利]一种定量蒿属植物花粉中nsLTP过敏原的方法有效
申请号: | 202011210352.1 | 申请日: | 2020-11-03 |
公开(公告)号: | CN112710837B | 公开(公告)日: | 2022-05-17 |
发明(设计)人: | 高中山;赵岚;高毕远;付婉艺 | 申请(专利权)人: | 浙江大学 |
主分类号: | G01N33/68 | 分类号: | G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/58 |
代理公司: | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人: | 沈金龙 |
地址: | 310013 浙江*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 定量 植物 花粉 nsltp 过敏原 方法 | ||
1.一种定量蒿属植物花粉中nsLTP过敏原的方法,其特征在于,使用双单抗夹心酶联免疫吸附实验进行定量,其中一抗为A2-B8单抗,来自杭州艾乐吉生物科技有限公司,货号MA-A2B8;二抗为A9-G10单抗,来自杭州艾乐吉生物科技有限公司,货号MA-A9G10,
蒿属植物为黄花蒿、艾蒿、茵陈蒿、细裂叶莲蒿、大籽蒿、野艾蒿或北艾。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,二抗用生物素标记。
3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,使用HRP标记的羊抗鼠IgG结合二抗后再加TMB避光显色后进行吸光值检测。
4.如权利要求3所述的方法,其特征在于,使用蒿属植物对应的nsLTP过敏原标准品进行检测得到吸光值后绘制标准曲线,将待检测的蒿属植物花粉样品检测得到的吸光值代入标准曲线计算得到相应浓度。
5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,北艾用rArt v 3.0201标准品,黄花蒿或细裂叶莲蒿用nArt an 3标准品,艾蒿或野艾蒿用nArt ar 3标准品,茵陈蒿用nArt ca 3标准品,大籽蒿用nArt si 3标准品。
6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,rArt v 3.0201标准品的最低检测阈值为0.25ng/ml,最佳浓度测定范围为2-128ng/ml;nArt an 3标准品的最低检测阈值为0.25ng/ml,最佳浓度测定范围为2-128ng/ml;nArt ar 3标准品的最低检测阈值为2ng/ml,最佳浓度测定范围为4-128ng/ml;nArt ca 3标准品的最低检测阈值为0.5ng/ml,最佳浓度测定范围为4-128ng/ml;nArt si 3标准品的最低检测阈值为1ng/ml,最佳浓度测定范围为8-256ng/ml。
7.如权利要求1所述的方法,其特征在于,一抗和二抗的使用浓度均为3μg/ml。
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