[发明专利]抗体定向标记多聚生物素的方法

说明书

本发明提供了一种抗体定向标记多聚生物素的方法，包括：利用生物素或其衍生物上的羧基与载体的表面的氨基反应，反应结束后去除游离的生物素，然后加入冻干保护剂进行冷冻干燥处理得到生物素多聚体；利用氧化剂将抗体的Fc段糖链上的邻羟基氧化为醛基，封闭剂封闭反应后，去除非蛋白物质，浓缩，得到醛基化抗体；使用复溶剂将冷冻干燥保存的生物素多聚体溶解，然后加入醛基化抗体进行交联反应一段时间，加入稳定剂，得到生物素化抗体。本发明的方法通用性强，适用范围广，获得的生物素化抗体亲和力强、特异性高、信号放大能力强。

技术领域

本申请涉及生物技术领域，具体地，涉及一种抗体定向标记多聚生物素的方法。

背景技术

抗体(antibody)是指机体由于抗原的刺激而产生的具有保护作用的蛋白质，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的蛋白质。Ig可形成“Y”字型结构，称为Ig单体，是构成抗体的基本单位。抗体根据其结构组成可分为IgA、IgG、IgD、IgE、IgM等不同不亚型，每种亚型的抗体在体内的作用及含量均有所不同。

抗体的整体结构可分为以下三部分：第一，重链和轻链：天然Ig分子含有四条异源性多肽链，其中，分子量较大的两条链称为重链(heavy chain，H)，而分子量较小的两条链称为轻链(Light chain，L)。第二，可变区(Fab)和恒定区(Fc)：Ig轻链和重链中靠近N端氨基酸序列变化较大的区域称为可变区(variable region，V)，简写为Fab段；靠近C端的氨基酸序列相对稳定的区域，称为恒定区(constant region，C)，简写为Fc段。第三，铰链区：铰链区(hinge region)位于CH1与CH2之间，铰链区两条重链靠二硫键连接，组成抗体的二价(多价)结构。

抗体目前广泛应用于医药、诊断等多个领域，根据其应用场景及目的的不同，需对天然抗体进行进一步的修饰或与其他物质进行偶联。在诊断试剂领域，根据抗原抗体特异性反应用于不同待检物质的检测。抗体与相应标志物、载体的偶联技术是诊断试剂能够得以开发应用的基础。其应用场景可分为以下几类：一、抗体与酶(碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶等)偶联，制备酶标抗体，用于诊断试剂信号物质的发光。二、抗体与载体偶联，包括磁微粒、乳胶微球等载体。三、抗体与小分子物质偶联，如荧光素、生物素、多肽类物质等。

生物素－亲和素系统(Biotin-Avidin—System，BAS)是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统。目前，BAS广泛应用于医学各领域，生物素—亲和素系统几乎可与目前研究成功的各种标记物结合。生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应，使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏。它已成为目前广泛用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究的新技术。

发明内容

针对现有技术的缺陷与不足，本发明主要目的包含两个方面：第一，实现抗体定向标记生物素；第二，提升生物素化抗体信号放大能力。本发明提供的方案无需破坏抗体天然结构，无需进行重组构建序列，利用天然抗体Fc段多糖链，人工合成生物素多聚体，即可实现抗体定向标记生物素。该方法通用性强，适用范围广，获得的生物素化抗体亲和力强、特异性高、信号放大能力强。

本发明提供了一种抗体定向标记多聚生物素的方法，包括：利用生物素或其衍生物上的羧基与载体的表面的氨基反应，反应结束后去除游离的生物素，然后加入冻干保护剂进行冷冻干燥处理得到生物素多聚体；利用氧化剂将抗体的Fc段糖链上的邻羟基氧化为醛基，封闭剂封闭反应后，去除非蛋白物质，浓缩，得到醛基化抗体；使用复溶剂将冷冻干燥保存的生物素多聚体溶解，然后加入醛基化抗体进行交联反应一段时间，加入稳定剂，得到生物素化抗体。

在上述方法中，其中，所述生物素或其衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺酯。

在上述方法中，其中，所述载体为富含伯氨基的大分子化合物。

在上述方法中，其中，所述载体为牛血清白蛋白(BSA)。