[发明专利]一种L-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法

权利要求书

1.一种L-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法，其特征在于，所述方法包括：

菌体活化：将保藏在-80℃冰箱中的温度敏感型谷氨酸棒杆菌接种到斜面培养基上传代活化，传代两次；

种子培养：将活化好的菌株用无菌水洗脱，洗脱后全部接种到配置好的种子培养基中进行种子培养；所述种子培养条件为：温度维持在32℃左右，溶氧控制在20~40%，pH通过氨水控制在7.0左右；

发酵培养：当种子培养基中的菌体量OD₆₀₀达到40以上时，按20%的接种量接种到发酵培养基中，当菌体达到对数生长期时，开始流加体积分数为40~80%的全营养培养基。

2.根据权利要求1所述的一种L-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法，其特征在于：所述的全营养培养基为：玉米浆干粉30 g/L，豆粕水解液20 mL/L，KH₂PO₄2.5 g/L，MgSO₄·7H₂O1.2 g/L，KCl 1 g/L，MnSO₄10 mg/L，FeSO₄10 mg/L，甲硫氨酸0.5 g/L，V_H3 mg/L，V_B10.5mg/L。

3.根据权利要求1所述的一种L-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法，其特征在于：所述的对数生长期的菌体量OD₆₀₀值为12~18左右。

4.根据权利要求1所述的一种L-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法，其特征在于：所述的全营养培养基的流加方式为恒速流加。

5.根据权利要求1所述的一种L-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法，其特征在于：所述的流加时间为在发酵结束前4-8h停止流加全营养培养基。

6.根据权利要求1所述的一种L-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法，其特征在于：所述的发酵条件为：发酵初始温度为32℃，当发酵液中菌体量OD₆₀₀达到28时，将温度在30 min内升至37.5℃，1h后升温至38℃；通过控制转速和通风将溶氧控制在20~40%；通过氨水控制pH在7.0左右。

7.根据权利要求1所述的一种L-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法，其特征在于：所述菌株为温度敏感型谷氨酸棒杆菌。

8.根据权利要求1所述的一种L-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法，其特征在于：所述斜面培养基为蛋白胨5 g/L，牛肉膏10 g/L，酵母粉4 g/L，玉米浆干粉25 mL/L，KH₂PO₄1g/L，MgSO₄0.2 g/L，NaCl 1 g/L，琼脂粉25 g/L，甲硫氨酸0.2 g/L，pH=6.8~7.0。

9.根据权利要求1所述的一种L-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法，其特征在于：所述的种子培养基为：葡萄糖 40 g/L，玉米浆干粉 10 g/L，KH₂PO₄2. g/L，MgSO₄·7H₂O0.8g/L，MnSO₄5 mg/L，FeSO₄5 mg/L，苏氨酸1 g/L，V_H10 mg/L。

10.根据权利要求1所述的一种L-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法，其特征在于：所述的发酵培养基为：葡萄糖60 g/L，玉米浆30 g/L，酵母膏5 g/L，豆粕水解液 20 mL/L，KH₂PO₄2.5 g/L，MgSO₄·7H₂O1.2 g/L，KCl 1 g/L，MnSO₄10 mg/L，FeSO₄10 mg/L，苏氨酸 1g/L，甜菜碱1 g/L，V_H3 mg/L，V_B10.5 mg/L。