[发明专利]一种L-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法

说明书

本发明属于氨基酸发酵技术领域，公开了一种温度敏感型谷氨酸棒杆菌发酵生产L‑谷氨酸的全营养流加高密度发酵方法，包括：将温度敏感型谷氨酸棒杆菌接种到发酵液中，在其生长到对数期时，向发酵液中持续流加全营养培养基，所述全营养培养基包括钾盐、镁盐等无机盐离子和其他温度敏感型谷氨酸棒杆菌生长所需的各种生长因子。本发明在菌体的对数生长期开始流加全营养培养基，流加的全营养培养基能够及时弥补菌体因生长和生产而消耗的营养物质，使菌体始终处于最适发酵环境中，提高发酵液中菌体密度；同时，在发酵后期，全营养培养基的流加也能提高菌体活力，保证菌体的生产性能，从而L‑谷氨酸的产量。

技术领域

本发明属于氨基酸发酵技术领域，涉及一种L-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法，具体涉及一种温度敏感型谷氨酸棒杆菌发酵生产L-谷氨酸的全营养流加高密度发酵方法。

背景技术

目前,我国的味精行业迅速发展，产量高居世界首位，年需求量达到了119万吨，同时，随着各类小食品、食品加工业冷藏盐渍食品和方便食品的不断增加，味精产品销路旺盛，市场潜力巨大，进而带动了谷氨酸行业的发展，据统计,全国谷氨酸产量近300万吨，并且生产规模有进一步增大的趋势。

温度敏感型谷氨酸棒杆菌是一种L-谷氨酸生产的新兴菌株，其具有在高温下能够使菌体细胞膜结构发生变化，从而增加细胞膜的通透性，使得L-谷氨酸得以分泌的特点，因此温度敏感型谷氨酸棒杆菌即使在高生物素条件下依旧能够进行L-谷氨酸发酵生产。目前，利用温度敏感型谷氨酸棒杆菌进行L-谷氨酸发酵的方法，主要是发酵前期将温度控制在28℃~33℃，使菌体快速增长；当发酵液中菌体OD₆₀₀达到20~24时，将温度在30 min内提高至37℃~40℃，之后菌体进行适度的剩余生长，此时菌体开始在发酵液中大量积累L-谷氨酸。然而按照现有的生产方法进行生产时，初期温度敏感型谷氨酸棒杆菌生长速度较为缓慢OD₆₀₀到达20~24的时间较长，后续剩余生长较少，菌体量小，影响L-谷氨酸产量，同时在发酵后期菌体活力会出现明显下降，进一步影响菌体生产L-谷氨酸的性能。

发明内容

针对上诉所提到的技术问题，本发明提供了一种L-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法。

一种L-谷氨酸全营养流加高密度发酵的方法，该方法包括：

（1）菌体活化：将保藏在-80℃冰箱中的温度敏感型谷氨酸棒杆菌接种到斜面上传代活化，传代两次。所述斜面培养基为蛋白胨5 g/L，牛肉膏10 g/L，酵母粉4 g/L，玉米浆干粉25 mL/L，KH₂PO₄1 g/L，MgSO₄0.2 g/L，NaCl1 g/L，琼脂粉25 g/L，甲硫氨酸0.2 g/L，pH=6.8~7.0；

（2）种子培养：将活化好的菌株用无菌水洗脱，洗脱后全部接种到配置好的种子发酵液中进行种子培养。所述的种子培养基为：葡萄糖 40 g/L，玉米浆干粉 10 g/L，KH₂PO₄2.g/L，MgSO₄·7H₂O0.8 g/L，MnSO₄5 mg/L，FeSO₄5 mg/L，苏氨酸1 g/L，V_H10 mg/L。所述种子培养条件为：温度维持在32℃左右，溶氧控制在20~40%，pH通过氨水控制在7.0左右。