[发明专利]一种基于报告基因方法检测PVRIG抗体的生物学活性的方法

权利要求书

1.一种基于报告基因方法检测PVRIG抗体的生物学活性的方法，其特征在于，将PVRIG效应细胞和PVRL2人工抗原递呈细胞与待测样品混合后共孵育，通过荧光素酶报告基因法检测抗PVRIG单克隆抗体的生物学活性。

2.一种基于报告基因方法检测PVRIG抗体的生物学活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、构建PVRIG效应细胞和PVRL2人工抗原递呈细胞；

步骤二、测定抗PVRIG单克隆抗体与PVRIG效应细胞的结合能力：将PVRIG效应细胞与待测样品孵育，加入荧光标记的二抗检测抗体与PVRIG效应细胞的结合，通过流式细胞仪检细胞的平均荧光强度，分析数据；

步骤三：将PVRIG效应细胞和PVRL2人工抗原递呈细胞与抗PVRIG单克隆抗体混合后共孵育，加入发光底物，使用酶标仪读取荧光强度；

步骤四：以不加抗体的空白对照组读值为基础，将步骤三所得读值与空白对照组平均值作比较，获得荧光强度的倍比变化，确定抗PVRIG单克隆抗体的生物学活性。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤一中构建PVRIG效应细胞的具体方法为：

（1）将人PVRIG全长基因片段插入到含有NFAT-RE-luc2P的慢病毒表达载体，与pLP1、pLP2和pLP/VSVG三质粒混合转染293FT细胞;

（2）用步骤（1）所得慢病毒感染Jurkat细胞；在含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养基中培养，培养箱37℃、5% CO2；细胞密度不超过2×106 个/mL；

（3）通过磁珠筛选的方法富集PVRIG阳性的细胞。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤一中构建PVRL2人工抗原递呈细胞的具体方法为：

（1）将人PVRL2全长基因片段插入到慢病毒表达载体，与pLP1、pLP2和pLP/VSVG三质粒混合转染293FT细胞；

（2）用步骤（1）所得慢病毒感染人工抗原递呈细胞；在含10%胎牛血清的F12K完全培养基中培养，培养箱37℃、5% CO2，细胞汇合度不超过80%；

（3）通过极限稀释法挑取单克隆细胞。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述PVRL2人工抗原递呈细胞的接种密度为3×10⁵ ~5×10⁵个/mL。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述PVRIG效应细胞的接种密度为3×10⁵ ~5×10⁵个/mL。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述待测样品为所述待测样品为抗PVRIG单克隆抗体，浓度为0 nM~66.7 nM。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，PVRIG效应细胞和PVRL2人工抗原递呈细胞与待测样品于37 ℃、5% CO2培养箱中共孵育5~6小时。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述发光底物为：萤火虫荧光素酶。