[发明专利]一种抗霉抗粘饲料的生产方法

权利要求书

1.一种抗霉抗粘饲料的生产方法，其特征在于包括以下步骤：

S1、处理主料：将主料豆粕粉碎过60目筛网，备用；

S2、混料：将发酵菌剂、水、菌酶、主料按0.1～0.2％：30～40％：1～5％：55～68％的比例混合均匀；

S3、发酵：将混匀的原料装入聚乙烯塑料袋中，袋长宽为620cm×125cm，每袋装料40-50kg，上部预留3-5升空气容量，用扎带将口封上，在聚乙烯塑料外面套上相应大小编织袋，送入发酵车间28℃恒温发酵，前2天是好氧菌在发挥作用，后面待氧气耗尽后，厌氧菌开始快速增长，物料开始酸化，5～7天得到发酵饲料成品；

所述的发酵菌剂由生物菌剂1、生物菌剂2、生物菌剂3按体积比1:1:1的比例复合混匀而成，要求总菌液或孢子液≥1.0×10⁹CFU/mL，其中：

A、所述生物菌剂1的制备方法如下：

1)所需的发酵菌种：短小芽孢杆菌(A)、荧光假单胞菌(B)、土壤放射杆菌(C)、红螺菌(D)和硝化细菌(E)；

2)所需的发酵培养基：1.5％葡萄糖、1％肉粉、1％奶粉、1％豆粕、4‰低蛋白含盐乳清粉、2‰鱼粉、0.2‰硫酸镁、0.2‰轻质碳酸钙、0.2‰磷酸氢二钾、1‰复合维生素、适量水；

3)一级种子液培养：用接种环刮取步骤1)所述5个发酵菌种，分别接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，28℃～37℃，180～200rpm，摇瓶培养24～48小时，获得一级菌种种子液；

4)二级种子液培养：将步骤3)的一级菌种种子液按照体积比为0.5％～5％的比例分别接种到步骤2)的发酵培养基中，28℃～37℃，180～200rpm，摇瓶培养24～48小时，获得二级菌种种子液；

5)三级发酵扩繁：先在发酵罐中加入发酵罐容积70％的水，按照步骤2)中的培养基配方按比例将各种物料放入发酵罐，在发酵罐及内含物料高温蒸汽灭菌结束并冷却至35℃左右后，在无菌条件下往各发酵罐分别按照每升培养基添加体积比2％～5％的二级菌种种子液，让各个菌种在发酵罐中以28℃～37℃的温度，氧气通气量为0.04～0.08(v/v·min)的培养条件下扩繁2～3天，使扩繁后的各个单菌菌液的浓度≥1.0×10⁹CFU/mL，发酵结束后取各发酵罐内的A/B/C/D/E菌液按体积比0.5～3.5:1.0～3.5:0.5～3.5:0.8～3.5:0.5～3.5混合备用；

B、所述生物菌剂2的制备方法如下：

1)所需的发酵菌种：枯草芽孢杆菌(KC)、地衣芽孢杆菌(DA)、巨大芽孢杆菌(MF-3)；

2)所需的发酵培养基：1.5％葡萄糖、1％肉粉、1％奶粉、1％豆粕、8‰低蛋白含盐乳清粉、2‰鱼粉、0.2‰硫酸镁、0.2‰轻质碳酸钙、0.2‰磷酸氢二钾、1‰复合维生素、适量水；

3)一级好氧发酵菌种种子液培养：用接种环刮取步骤1)所述3个发酵菌种，分别接种于LB液体培养基中，28℃～37℃，180～200rpm，摇瓶培养24～48小时，获得一级好氧发酵菌种种子液；

4)二级好氧发酵菌种种子液培养：将步骤3)的一级好氧发酵菌种种子液按照体积比为0.5％～5％的比例分别接种到步骤2)的发酵培养基中，28℃～37℃，180～200rpm，摇瓶培养24～48小时，获得二级好氧发酵菌种种子液；

5)三级发酵扩繁：先在发酵罐中加入发酵罐容积70％的水，然后按照步骤2)中的发酵所需培养基配方按比例将各种物料放入发酵罐，在发酵罐及内含物料高温蒸汽灭菌结束冷却至35℃左右后，在无菌条件下往各发酵罐分别按照每升培养基添加体积比2％～5％的比例添加二级好氧发酵菌种种子液，让各个生物菌种在发酵罐中以28℃～37℃的温度，氧气通气量为0.04～0.08(v/v·min)的培养条件下扩繁2～3天，使扩繁后的各个单菌菌液的浓度≥1.0×10⁹CFU/mL，再按体积比1:1:1将各菌液混合备用；

C、所述生物菌剂3的制备方法如下：

1)所需的发酵菌种：乳酸乳球菌(SG)、凝结芽孢杆菌(NJ)；

2)所需的发酵培养基：2％葡萄糖、5％奶粉、1％蛋白胨、5‰酵母粉、适量水；

3)一级发酵菌种厌氧培养：用接种环刮取步骤1)所述乳酸乳球菌和凝结芽孢杆菌，分别接种于MRS和麦芽汁液体培养基中，37℃，静置培养24～48小时，获得一级发酵菌种种子液；

4)二级发酵菌种种子液厌氧培养：将步骤3)的一级发酵菌种种子液按照体积比为0.5％～5％的比例分别接种到步骤2)的发酵培养基中，37℃，静置培养24～96小时，获得二级发酵菌种种子液；

5)三级菌种厌氧扩繁培养：先在发酵罐中加入发酵罐容积70％的水，然后按照步骤2)中的所需培养基配方按比例将各种物料放入发酵罐，在发酵罐及内含物料高温蒸汽灭菌结束冷却至35℃左右后，在无菌条件下按照每升培养基添加2％～5％的比例往各发酵罐添加二级发酵菌种种子液，使各菌种在发酵罐中以37℃的温度，二氧化碳通气量为0.002～0.005(v/v·min)的培养条件下扩繁48-72小时，使扩繁后的各个单菌菌液的浓度≥1.0×10⁹CFU/mL，再按体积比1:1将各菌液混合备用；

所述的菌酶由以下方法制得：

1)所需的发酵菌种：米曲霉(MQ)、黑曲霉(HQ)、酵母菌(YT)；

2)发酵所需培养基：1.5％葡萄糖、1％豆粕、0.2‰硫酸镁、0.2‰轻质碳酸钙、0.2‰磷酸二氢钾、0.1‰复合维生素、适量水；

3)一级好氧发酵菌种种子液培养：用接种环从平板上分别刮取步骤1)所述3个好氧发酵菌种，接种于PDA液体培养基中，25℃～30℃，180～200rpm，摇瓶培养24～48小时，获得一级好氧发酵菌种种子液；

4)二级好氧发酵菌种种子液培养：将步骤3)的一级好氧发酵菌种种子液按照体积比为2％～5％的比例分别接种到步骤2)的发酵培养基中，25℃～30℃，180～200rpm，摇瓶培养24～48小时，获得二级好氧发酵菌种种子液；

5)三级发酵扩繁：先在发酵罐中加入发酵罐容积70％的水，然后按照步骤2)中的发酵所需培养基配方按比例将各种物料放入发酵罐，在发酵罐及内含物料高温蒸汽灭菌结束冷却至35℃左右后，在无菌条件下按照每升培养基添加体积比为2％～5％的比例往各发酵罐分别添加二级好氧发酵菌种种子液，让各个生物菌株在发酵罐中以20℃～25℃的温度，氧气通气量为0.04～0.08(v/v·min)的培养条件下扩繁3天，使扩繁后的各菌液或孢子浓度≥1.0×10⁹CFU/mL，再按体积比1:1:1将各菌液混合备用；

6)将步骤5)混合的菌液与豆粕、麦麸、纯净水水按照0.1:1.5:5:3.4的比例混合均匀，装入具有呼吸阀的发酵袋中，发酵5天，获得菌酶，其中所述豆粕和麦麸均需粉碎过60目筛网后灭菌使用。