[发明专利]一种微生物发酵产多拉菌素的方法

说明书

本发明提供了一种微生物发酵产多拉菌素的方法，涉及发酵技术领域，该方法包括以下步骤：(1)将经过斜面培养基和种子培养基培养的种子液接种到发酵培养基中进行发酵培养；(2)在发酵前期、中期和后期添加发酵诱导补加剂，发酵结束后得到多拉菌素；其中，发酵培养基包括：淀粉、淀粉酶、棉籽饼粉、黄豆饼粉、酵母粉、氯化钠、轻质碳酸钙、泛酸、大豆卵磷脂、环己甲酸钠和水。上述方法能够有效促进阿维链霉菌次级代谢产素，得到的多拉菌素效价较高。

技术领域

本发明涉及发酵技术领域，具体涉及一种微生物发酵产多拉菌素的方法。

背景技术

多拉菌素是一种大环内酯类抗寄生虫药物，是一种以环已氨羧酸为前体，通过基因重组的阿维链霉菌新菌株发酵而成的一种阿维菌素类抗生素。多拉菌素为阿维链霉菌的次级代谢产物，通常，碳源、氮源以及温度等均会对其发酵生产造成影响，而在其发酵过程中，前体物质环己羧酸或其盐的加入十分关键，尽管前体物质的含量并不会影响阿维链霉菌的活性，但当环己酸含量较低时也将成为多拉菌素生产短板所在，而当其含量较高时则将会对阿维链霉菌的代谢产生抑制作用。

中国专利CN109576196A公开了一种生产多拉菌素的发酵培养基及多拉菌素的生产方法，其中，发酵培养基组成包括：淀粉100-140g/L、淀粉酶0.1-0.2g/L、黄豆饼粉12-18g/L、棉籽饼粉12-18g/L、酵母粉0.5-1.5g/L、2,2-甲基丁酸0.01-0.2g/L、环己甲酸或者环己甲酸钠0.2-0.4g/L。该发明通过对发酵培养基及多拉菌素生产方法的改进，显著提高多拉菌素的发酵水平，在发酵370h，效价达到3545μg/ml，且整个生产工艺简单易操作，有利于工业化生产。但上述方法主要针对发酵培养基进行研究，其中环己甲酸等成分均为直接加入，除糖外未对其进行补加，进而将极可能影响发酵效率，影响多拉菌素的产量。

针对以上问题，近年来，部分研究者开始研究不同时期补加前体、碳源以及氮源等方式，从而促进多拉菌素的生产。例如，中国专利CN104651427B公开了一种制备多拉菌素的方法，该方法通过控制环己羧酸或其盐、补料糖的补加时间、次数等对多拉菌素的生产进行控制，得到的方法适用于500L发酵罐通过发酵方式生产多拉菌素。但该发明中仍主要以常规性用料结合补加情况进行优化设定，尽管能够在一定程度上促进多拉菌素的生产，但其最终的产量可以预期，仍难以克服环已羧酸或其盐在发酵过程中的短板，因此所得到的多拉菌素平均发酵单位较低。

针对现有的多拉菌素生产方法存在的发酵水平以及效率较低等问题，亟需寻找一种效率高的多拉菌素的生产方法，进而促进阿维链霉菌次级代谢产多拉菌素。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种微生物发酵产多拉菌素的方法。该方法能够有效促进阿维链霉菌次级代谢产素，得到的多拉菌素效价较高。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明提供了一种微生物发酵产多拉菌素的方法，包括以下步骤：

(1)将经过斜面培养基和种子培养基培养的种子液接种到发酵培养基中进行发酵培养；

(2)在发酵前期、中期和后期添加发酵诱导补加剂，发酵结束后得到多拉菌素；

所述发酵培养基包括：淀粉、淀粉酶、棉籽饼粉、黄豆饼粉、酵母粉、氯化钠、轻质碳酸钙、泛酸、大豆卵磷脂、环己甲酸钠和水。

进一步地，所述发酵培养基包括：淀粉110-120g/L、淀粉酶0.08-0.15g/L、棉籽饼粉14-16g/L、黄豆饼粉8-15g/L、酵母粉0.5-1.5g/L、氯化钠1-3g/L、轻质碳酸钙8-10g/L、泛酸0.001-0.002g/L、大豆卵磷脂2-5g/L、环己甲酸钠0.1-0.2/L和余量水。