[发明专利]一种端粒相对长度检测试剂盒

权利要求书

1.一种端粒相对长度检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

端粒基因引物序列，如SEQ ID NO.1-2所示；

内参基因引物序列，如SEQ ID NO.3-4所示，所述内参基因为YH-1；

探针序列，如SEQ ID NO.5所示；

内参基因：多拷贝序列作为内参基因序列；

标准品：永生化细胞系DNA。

2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述端粒基因通过SYBRgreen检测，所述内参基因通过分子信标探针法检测，所述端粒基因和内参基因检测在同一管内进行。

3.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述内参基因的筛选：通过Blast在人类全基因组序列中，筛选出200BP多拷贝序列作为内参基因序列。

4.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述内参基因单拷贝序列如SEQ ID NO.6所示；试剂盒还包括内部质控标准品及阴性对照，其中阴性对照为超纯水。

5.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括计算得到各检测样本的T/S值的计算系统。

6.根据权利要求5所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒内部质控体系的建立方法如下：

(1)选取浓度为15-20ng/μL永生化细胞系DNA为标准品DNA，完成内参qPCR反应与端粒qPCR反应，至少重复三次实验，记录每次实验中的内参CT值及端粒CT值；

(2)分别计算标准品样本在每次实验中的△CT值；

(3)取所有标准品样本△CT值的平均值作为标准品样本的△CT值，即△CT^(标准品)；

(4)样品的△CT值为CT(端粒)-CT(内参)，即△CT^(样品)；

(5)计算T/S＝2^{-(△CT(样品)-△CT(标准品))}，其中T为待测样品，S为标准品，T/S为待测样品与标准品的端粒相对长度比。

7.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述内参基因的qPCR反应体系包含：

2×SYBR Green I qPCR Mix 10μL；

内参基因正向引物0.1μL；

内参基因反向引物1μL；其中，所述内参基因的正向引物和反向引物的浓度均为10μmol/L；50×ROX Reference DyeII 0.4μL；

Uniprimer探针1uL，探针浓度为10umol/L；

H₂O 3.3μL；

基因组DNA 4μL，其中基因组DNA的浓度为15ng/μL。

8.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述端粒基因的qPCR反应体系包含：

2×SYBR Green I qPCR Mix 10μL；

端粒基因正向引物0.1μL；

端粒基因反向引物0.1μL；其中，所述端粒基因的正向引物和反向引物的浓度均为10μmol/L；

50×ROX Reference DyeII 0.4μL；

Uniprimer探针1uL，探针浓度为10umol/L；

H₂O 3.3μL；

基因组DNA 4μL，其中基因组DNA的浓度为15ng/μL。

9.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于，所述内参基因和端粒基因的qPCR反应条件如下：

95℃预变性2min；95℃变性15s，50℃退火1s，72℃延伸45s，在50℃退火时采集荧光。

10.一种如权利要求1所述试剂盒在生物学年龄评价中的应用。