[发明专利]检测剑麻紫色卷叶病植原体的实时荧光定量LAMP引物组及其应用

权利要求书

1.检测紫色卷叶病植原体的LAMP引物组，由序列表中序列1所示的核苷酸、序列表中序列2所示的核苷酸、序列表中序列3所示的核苷酸以及序列表中序列4所示的核苷酸组成。

2.一种检测剑麻紫色卷叶病植原体的试剂盒，包括权利要求1所述的LAMP引物组。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括LAMP反应试剂。

4.权利要求1所述的LAMP引物组以及权利要求2或3所述的试剂盒在检测剑麻紫色卷叶病植原体中的应用。

5.检测剑麻紫色卷叶病植原体的方法，包括下述步骤：

1） 提取待测样品DNA；所述待测样品为剑麻紫色卷叶病病株组织总DNA；

2）以待测样品DNA为模板，用权利要求1所述的LAMP引物组进行实时荧光定量LAMP扩增；

3）通过QuantStudio 6 Flex实时荧光定量仪进行检测，并进行实验有效性判定；检测结果如无 Ct值且无典型的扩增曲线，则表示样品中不含有剑麻紫色卷叶病植原体；如观察到Ct值≤35.0并出现典型的扩增曲线，表示样品中含有剑麻紫色卷叶病植原体。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：

所述的LAMP扩增反应体系为25 μL：ddH₂O 10.25 μL；10×Bst-DNA Polymerase Buffer2.5 μL；10 mM dNTP 3.5 μL；5 mM的序列1所示的核苷酸和5 mM的序列表中序列2所示的核苷酸各1 μL；20 mM的序列表中序列3所示的核苷酸和20 mM的序列表中序列4所示的核苷酸各1.5 μL；100 mM Mg²⁺ 1.25 μL， Bst2.0 DNA Polymerase 0.5 μL；SYTO-9 绿色荧光核酸染料 1μL; 20~30 ng/μL 的DNA模板1μL。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：实时荧光定量LAMP扩增在63℃条件下进行。