[发明专利]一种检测猫冠状病毒的试纸条及其制备方法、试剂盒、检测方法

说明书

本发明涉及一种检测猫冠状病毒的试纸条以及由该试纸条制备而成的试剂盒，试纸条包括底板，底板上从左到右依次搭接样品垫层、胶体金垫层、硝酸纤维素膜层和吸水层，胶体金垫层上包被有胶体金颗粒标记的猫冠状病毒单克隆抗体和猫传染性腹膜炎病毒多克隆抗体；硝酸纤维素膜层上包被有猫冠状病毒单克隆抗体作为T1检测线，还包被有猫传染性腹膜炎病毒多克隆抗体作为T2检测线，以及包被有羊抗鸡IgG作为质控线。应用试纸条、试剂盒的形式检测猫冠状病毒抗原，操作简单，达到真正的POCT检测，有效控制该病毒传播。且试纸条中多抗体标记及多抗体包被的形式，最大限度地提高试剂灵敏度，增加检出率。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种检测猫冠状病毒的试纸条及其制备方法、试剂盒、检测方法。

背景技术

猫传染性腹膜炎(FIP)是感染猫冠状病毒而引起，该病最早发现于20世纪60年代，FIP分为渗出型和非渗出型，随着病情的推进，非渗出型FIP可转化为渗出型FIP。渗出型FIP主要临床特征为纤维蛋白性腹膜炎、胸膜炎、心包炎伴随腹腔、胸腔或心包积液；非渗出型FIP无明显积液，主要临床特征为不同器官出现肉芽肿样病变，包括眼睛及中枢神经系统。渗出型FIP和非渗出型FIP均伴有严重的系统性疾病并产生不同程度的胸腔或腹腔积液。

猫冠状病毒(Feline coronavirus，FCoV)为冠状病毒科冠状病毒属的成员，是家猫和野生猫致死性疾病FIP的病原。基于临床症状及产生的病理变化不同，FCoV分为两个生物型，猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus，FIPV)和猫肠道冠状病毒(Feline enteric coronavirus，FECV)。FECV在猫肠道中普遍存在，感染FECV的猫产生轻微的肠道症状，能够自愈，死亡率低。而FIPV感染会引起的猫科动物一种慢性进行性致死性传染病，以腹膜炎、腹水大量积聚为主要特征，不同年龄的猫均可感染，但老龄猫和两岁以下的猫发病率较高，纯种猫的发病率高于一般品种的家猫，传染率非常高。

FCoV在世界各地猫群中普遍存在，不同地区、饲养环境、品种的猫感染的FCoV阳性率存在较大差异，该病毒传播途径主要为粪口传播，少数可经衣物、食皿、寝具、人或昆虫等机械途径传播，潜伏期可达几个月，有些猫感染FCoV后可持续带毒长达10年。美国加利福尼亚一项血清学调查显示，单独饲养的宠物猫FCoV血清阳性率为20.0％，群居饲养的纯种猫血清FCoV阳性率为87.0％，因此FCoV的感染通常与猫的数量和饲养密度有关。虽然群居饲养不是流浪猫感染FCoV的主要原因，但是群居饲养环境使猫感染FCoV风险增加，尤其是流浪猫救助站的环境病毒载量更高，使猫更易于感染病毒。美国24家兽医教学医院历经10年对226720只猫进行研究，结果表明每200例新病例中就有一例是FIP。公猫和幼龄猫患FIP的风险较高，在美国兽医教学医院确诊中，6～24月龄的猫更易患病。通过对种群密度、饲养环境进行优化，可大大的降低群居饲养的猫感染FCoV后发展成FIP的发病率。

FCoV感染的实验室检查方法，主要有血清抗体筛查、RT-PCR法以及组织病理学染色切片等，这些检测方法均需要对猫类进行采血，而动物类采血，存在采血困难、样本量少的问题，另外，应用RT-PCR方法在渗出液中检测FCoV时，由于存在假阳性结果，该方法诊断特异性有限，且检测时间过长。亟需寻找一种快速方便的诊断试剂，能够及时有效地诊断猫类是否感染FCoV，避免感染FCoV后，发展成可导致患致死性疾病FIP。

发明内容

本发明的目的主要针对如何快速准确的检测猫冠状病毒的问题，提供了一种猫冠状病毒检测试纸条。