[发明专利]用于确定日本血吸虫个体基因型的多重PCR引物组合、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于确定日本血吸虫个体基因型的多重PCR引物组合，其特征在于，所述引物组合包括：

Sjp4-F:ACAAGCTCCAATCGTCTCTGA；

Sjp4-R:GAATACTGCCGCCCTTGTAA；

Sjp18-F:TCCTTTATCTGGGCTGTGGA；

Sjp18-R:TTTCAGCAGGATAACATGACG；

Sjp22-F:CAAAGCCTAAACGTCATAGACAG；

Sjp22-R:CAACCACCGATAAGTAGAGTGGA；

Sjp42-F:GCTGCAGCTTCTGTGTAGTAA；

Sjp42-R:GTCTTGCTCAGATCAGTTCGT；

Sjp58-F:TCCCAGTACCAATGTAGATGTG；

Sjp58-R:CTAATAAAGTCGTCAAGGAGCA；

Sjp60-F:CGATTCATTCATAGCCTGACT；

Sjp60-R:GAATCCCATCACAGATTAACG；

TS2-F:TTGTCAATAATTTCACTAGGTTCAC；

TS2-R:AATTAATAATTCACAAGTAAAACATCTAAGT。

2.一种含有如权利要求1所述的用于确定日本血吸虫个体基因型的多重PCR引物组合的用于扩增日本血吸虫多位点序列的试剂盒。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒基于Qiagen MM，包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反应缓冲液中的至少一种。

4.一种用于确定日本血吸虫个体基因型的多重PCR方法，其特征在于，利用如权利要求1所述的用于确定日本血吸虫基因型的多重PCR引物组合来对日本血吸虫个体进行基因分型。

5.如权利要求4所述的用于确定日本血吸虫个体基因型的多重PCR方法，其特征在于，所述确定日本血吸虫基因型的多重PCR方法包括以下步骤：

S1、提取目标DNA；

S2、以所述目标DNA为模板，采用所述引物组合进行多重PCR扩增反应；

S3、分析扩增产物。

6.如权利要求5所述的用于确定日本血吸虫个体基因型的多重PCR方法，其特征在于，多重PCR反应体系以15μL计为：

Sjp4-F:0.015μL；Sjp4-R:0.015μL；Sjp18-F:0.06μL；Sjp18-R:0.06μL；Sjp22-F:0.015μL；Sjp22-R:0.015μL；Sjp42-F:0.0375μL；Sjp42-R:0.0375μL；Sjp58-F:0.06μL；Sjp58-R:0.06μL；Sjp60-F:0.03μL；Sjp60-R:0.03μL；TS2-F:0.0375μL；TS2-R:0.0375μL；PCR MM：7.5μL；ddH₂O：5.99μL；DNA模板：1μL。

7.如权利要求5所述的用于确定日本血吸虫个体基因型的多重PCR方法，其特征在于，多重PCR反应条件为：95℃预变性5min；95℃变性30s，57-51℃退火90s，每次递减2℃，72℃延伸1.5min，共20个循环，然后50℃保持20个循环；最后68℃延伸10min。