[发明专利]用于确定日本血吸虫个体基因型的多重PCR引物组合、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及一种用于确定日本血吸虫个体基因型的多重PCR引物组合、试剂盒及方法，根据血吸虫的基因序列设计7对引物，并基于该7对引物建立了多重PCR反应体系，可实现对日本血吸虫个体进行基因分型。本发明的多重PCR反应体系经过实验内反复实验优化，具有扩增效果好、效率高的特点，并且，所选用的7个微卫星位点多态性高，利于对个体进行基因分型。

技术领域

本发明涉及一种用于确定日本血吸虫个体基因型的多重PCR引物组合、试剂盒及方法，属于生物检测技术领域。

背景技术

血吸虫病是一种严重危害人类健康的重大感染病，被世界卫生组织列为20种被忽视的热带病之一。目前，全球共有78个国家和地区流行血吸虫病，感染者超过2亿，近8亿人口面临感染威胁。我国流行日本血吸虫病，目前有数十个流行县尚未达到传播阻断标准，因此研究血吸虫病流行态势及血吸虫进化趋势具有重要意义。日本血吸虫全基因组测序已提供了完整(V2版)DNA序列，大量具有短串联重复序列的微卫星位点(简写STR)已被筛选。微卫星由2～6个核苷酸的串联重复片段构成，其重复单位的重复次数在个体间呈高度变异。这种变异产生的主要机制是DNA复制过程中产生了链滑动或DNA复制或修复时发生了错配，从而导致一个或几个重复单位的插入或缺失等。以微卫星位点为研究对象，根据其侧翼序列在其两侧设计一对互补引物，根据微卫星长度的多态性可对个体进行基因分型。其方法具有简便快速、DNA用量少，重复性高、稳定性好、可测算杂合度等优点，已应用于血吸虫种群遗传学研究。

但是常用的单重PCR反应，即一次扩增一个微卫星位点，效率低、成本高，且易增加实验操作错误。因此，一次扩增多个微卫星位点即采用多重PCR反应，将极大提高效率、降低成本，尤其是大大降低实验室工作量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于确定日本血吸虫个体基因型的多重PCR引物组合、试剂盒及方法，有利于开展血吸虫种群遗传学研究，极大提高了检测效率、降低了分析成本，利于推广。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于用于确定日本血吸虫个体基因型的多重PCR引物组合，所述引物组合包括：

Sjp4-F:ACAAGCTCCAATCGTCTCTGA；

Sjp4-R:GAATACTGCCGCCCTTGTAA；

Sjp18-F:TCCTTTATCTGGGCTGTGGA；

Sjp18-R:TTTCAGCAGGATAACATGACG；

Sjp22-F:CAAAGCCTAAACGTCATAGACAG；

Sjp22-R:CAACCACCGATAAGTAGAGTGGA；

Sjp42-F:GCTGCAGCTTCTGTGTAGTAA；

Sjp42-R:GTCTTGCTCAGATCAGTTCGT；

Sjp58-F:TCCCAGTACCAATGTAGATGTG；

Sjp58-R:CTAATAAAGTCGTCAAGGAGCA；

Sjp60-F:CGATTCATTCATAGCCTGACT；

Sjp60-R:GAATCCCATCACAGATTAACG；

TS2-F:TTGTCAATAATTTCACTAGGTTCAC；

TS2-R:AATTAATAATTCACAAGTAAAACATCTAAGT。

本发明还提供一种含有所述的用于确定日本血吸虫个体基因型的多重PCR引物组合的用于扩增日本血吸虫多位点序列的试剂盒。