[发明专利]标记型萘酰亚胺荧光探针及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了标记型萘酰亚胺荧光探针及其制备方法和应用。本发明首先公开了一种以碘乙酰胺为巯基反应基团的萘酰亚胺荧光探针，其结构式为式I所示。本发明进一步公开了制备所述标记型萘酰亚胺荧光探针的方法以及应用该荧光探针在定性或定量检测含巯基蛋白质的应用。本发明制备方法简单，容易大量获取，所制备的探针化合物含有羟基亲水基团，对电泳结果及后续仪器检测影响小，且含有较长的碳链作为连接臂以减少荧光团对蛋白质表面巯基烷基化的空间位阻；应用该探针化合物进行检测时，检测方法取样量小，不会受到环境中共存离子、活性氧及基质的影响，具有非常高的选择性和灵敏度，可用于各种含巯基蛋白质的定性与定量检测。

技术领域

本发明涉及萘酰亚胺荧光探针，尤其涉及检测含巯基蛋白质的标记型萘酰亚胺荧光探针及其制备方法和应用，属于标记型萘酰亚胺荧光探针及其制备和应用领域。

背景技术

含有活性巯基的蛋白质是动物组织和体液中的重要组成部分，参与很多细胞的生理功能，对于维持蛋白质的氧化还原环境起着重要的作用，如调节信号通路，对不同疾病如癌症、糖尿病及神经退行性疾病的响应情况。蛋白质中的巯基主要是指半胱氨残基中的巯基，很容易被活性氧、活性氮氧化，是非常活泼的基团。生物体的内源性含巯基蛋白质对于氧化还原平衡起着关键的作用，如具有一定的抗氧化作用，结合金属离子，能保护细胞，防止被氧化，因此，对活细胞内巯基类蛋白检测具有重要的生物学及医学意义。

萘酰亚胺类化合物因其荧光强、耐高温、稳定的特点，被广泛用作荧光染料。其衍生物中有多数都具有非常高的荧光量子产率、具有较大的共轭系统、良好的刚性共平面性、荧光发射波长适中、斯托克斯(Stocks)位移大、光稳定性好、易修饰、优良的DNA嵌入性能等诸多性能，在其共轭系统的两端引入了强烈的吸电性基团可形成推拉电子共轭体系，故能发射很强的荧光。萘酰亚胺大量应用于荧光分子探针的信号基团，广泛用于荧光染料、颜料、激光燃料、有机半导体材料、荧光探针等。

荧光检测技术方法简单并应用于许多领域，因其无创性，高灵敏度，高选择性，可操作性，低成本，快速响应，高时间分辨率和适当的有益特征而易于信号检测，已成为化学和生化研究中的重要工具。基于荧光标记的电泳是一种兼具分离和检测的手段。通过荧光探针对含巯基蛋白质的烷基化，可以对含巯基的蛋白质进行快速的定性及半定量。

发明内容

本发明的目的之一是提供标记型萘酰亚胺荧光探针。

本发明的目的之二在于提供该标记型酰亚胺荧光探针的制备方法。

本发明的目的之三在于将所述的标记型萘酰亚胺荧光探针应用于定性或定量检测含有巯基的蛋白质。

为实现以上目的，本发明采用了如下技术方案：

一种标记型酰亚胺荧光探针化合物Nap-I，其结构式为式I所示：

本发明还提供一种式I所示的荧光探针化合物的制备方法，包括：

(1)将4-溴-1,8-萘二甲酸酐溶于1,4-二氧六环中，滴加入乙醇胺进行反应得到式III所示的化合物Nap-Br；

(2)将式III所示的化合物溶于乙二醇甲醚中加入1,3-丙二胺进行反应得到式IV所示的化合物Nap-NH₂；

(3)将式IV所示的化合物Nap-NH₂溶于二氯甲烷中后加入三乙胺及氯乙酰氯进行反应得到式V所示的化合物Nap-Cl：

(4)将式V所示的化合物Nap-Cl溶于丙酮中，再加入碘化钠，氮气保护下反应得到式I所示的荧光探针化合物Nap-I。