[发明专利]一种检测赭曲霉毒素A的比色生物传感器

说明书

本发明提供了一种检测赭曲霉毒素A的比色生物传感器，包括血红素，TMB显色剂，aptamer、T链、发夹探针HP1、HP2和HP3，其序列如SEQ ID NO:1‑5所示。本发明构建的比色生物传感器，利用了核酸适配体的特异性识别实现了对目标物赭曲霉毒素A的高特异性检测；利用催化发夹组装循环放大功能，实现了trigger的循环利用，放大了检测信号，提高了检测的灵敏度，实现对目标物赭曲霉毒素A的超灵敏性检测；反应条件温和，反应速度快；由于使用TMB比色法，其检测方法操作简便，检测周期短、易携带。该传感器制备方法简单，性能稳定，TMB的重复性好，适用于食品中赭曲霉毒素A的检测和生物传感器产业化的实际应用；制作该生物传感器的工艺成本低，适用于产业化中价廉的要求。

技术领域

本发明属于生物传感器技术领域，涉及一种基于催化发夹组装检测赭曲霉毒素A的比色生物传感器。

背景技术

赭曲霉毒素是继黄曲霉毒素后又一个引起世界广泛关注的霉菌毒素。它是由曲霉属的7种曲霉和青霉属的6种青霉菌产生的一组重要的、污染食品的真菌毒素，其中毒性最大、分布最广、产毒量最高、对农产品的污染最重、与人类健康关系最密切的是赭曲霉毒素A（OTA）。国际癌症研究机构（IARC）根据几项动物研究中发现的大量致癌性证据，将OTA列为可能的人类致癌物（2B类）。此外，联合国粮农组织（FAO）估计，世界上约有25%的谷物受到霉菌毒素的污染。赭曲霉毒素A对动物和人类的毒性主要有肾脏毒、肝毒、致畸、致癌、致突变和免疫抑制作用。

目前检测赭曲霉毒素A的方法有很多，如光学分析法、电泳法、色谱法等。但这些分析方法存在程序繁琐、仪器昂贵、设备复杂等缺点，不适合现场检测。因此，开发一种快速、准确检测OTA的方法，对控制食品安全与质量具有重要意义。

发明内容

针对现有检测方法中仪器操作复杂、设备昂贵且需专业人员操作的缺点，本发明目的在于提供一种灵敏度高、特异性强、成本低的基于催化发夹组装检测赭曲霉毒素A的比色生物传感器。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

一种检测赭曲霉毒素A的比色生物传感器，包括血红素，TMB显色剂，aptamer、T链、发夹探针HP1、HP2和HP3，其序列如SEQ ID NO: 1-5所示。

一种含有上述生物传感器的试剂盒。

进一步的，所述试剂盒中还包括系列浓度的赭曲霉毒素A标准溶液。

一种利用上述生物传感器检测赭曲霉毒素A的方法，包括以下步骤：

（1）链状发夹探针HP1、HP2和HP3退火形成发卡结构；

（2）T链、aptamer杂交形成拱形探针；

（3）将发夹探针HP1、HP2、HP3、拱形探针、系列浓度的赭曲霉毒素A标准溶液和待测液在缓冲溶液中混合并进行反应，得产物液；

（4）将步骤（3）中产物液加入血红素孵育后再加入TMB显色剂进行显色并检测吸光度值，通过系列浓度赭曲霉毒素A的峰值处吸光度值做标准曲线，计算待测液中赭曲霉毒素A的浓度。

步骤（1）中，所述退火步骤为：溶液于95℃保温5 min，在置于0-4℃中退火。

步骤（2）中，所述杂交步骤为：溶液于95℃保温5 min，冷却至室温。

本发明的检测原理如下：

本发明的传感器共用到了5条DNA链，其序列（5’-3’）如下：

aptamer：

GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA