[发明专利]一种嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒、检测方法及其应用

权利要求书

1.一种嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒，其特征在于，包括刺激缓冲液、刺激质控A、刺激质控B、染色试剂、溶解试剂和清洗缓冲液；所述刺激缓冲液包括钙离子、肝素和白介素3；所述刺激质控A为抗高亲和性IgE受体的单克隆抗体；所述刺激质控B为fMLP；所述染色试剂为anti-CD63-FITC和anti-CCR3-PE的混合物。

2.根据权利要求1所述的嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒，其特征在于，所述溶解试剂为NH₄Cl、KHCO₃或Na₂EDTA的10倍浓缩液。

3.根据权利要求1所述的嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒，其特征在于，所述刺激缓冲液、刺激质控A和刺激质控B均为冻干粉，所述染色试剂为2.2mL，所述溶解试剂为25mL。

4.一种权利要求1所述的嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒的应用，其特征在于，所述试剂盒用于速发型过敏反应的体外检测和引起超敏反应的可疑过敏原检测。

5.一种权利要求1所述的嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）样本的采集：将静脉采血管颠倒数次，混匀抗凝血样；

（2）标记试管：对于每个患者，分别在每个试管上进行标记，

其中：PB = 患者背景；

PC1 = 抗高亲和性IgE受体的单克隆抗体刺激质控；

PC2 = fMLP刺激质控；

Ax-y=过敏原；

（3）细胞刺激：在每个患者标记好的试管中分别加入试剂盒中的刺激物；

PB试管中加入50μL刺激缓冲液，作为检测背景，

PC1试管中加入50μL刺激质控A，

PC2试管中加入50μL 的刺激质控B，

Ax-y试管中加入50μL过敏原溶液；

然后，在上述每个试管中分别加入100μL刺激缓冲液和50μL患者全血样本，轻柔混合；

（4）染色：向上述试管中分别加入20μL的染色试剂，轻柔混合，盖上管盖，37℃下水浴孵育15分钟；

（5）溶解：在步骤（4）的每个试管中分别加入2mL溶解试剂，轻柔混合；然后在离心机内离心5分钟，去除上清液，并用吸水纸进行吸干处理，之后用清洗缓冲液重悬细胞，轻柔涡旋，得到细胞混悬液；

（6）检测：对步骤（5）所得的细胞混悬液采用流式细胞仪进行检测。

6.根据权利要求5所述的嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤（1）中血样的保存：对于蛋白质过敏原的检测，血样采集后需要立即进行细胞刺激或者在2-8℃下最多保存48小时；对于药物和化学过敏原的检查，采集后的血样在2-8℃下最多保存24小时。

7.根据权利要求5所述的嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤（5）中的溶解试剂需要预热至18-28℃。

8.根据权利要求5所述的嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤（5）中离心机的离心力为500xg。

9.根据权利要求5所述的嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤（5）中清洗缓冲液为300μL。

10.根据权利要求5所述的嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤（6）中的细胞混悬液需要在避光2-8℃下进行保存。