[发明专利]一种嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒、检测方法及其应用

说明书

本发明公开了一种嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒，包括刺激缓冲液、刺激质控A、刺激质控B、染色试剂、溶解试剂和清洗缓冲液；所述刺激缓冲液包括钙离子、肝素和白介素3；所述刺激质控A为抗高亲和性IgE受体的单克隆抗体；所述刺激质控B为fMLP；所述染色试剂为anti‑CD63‑FITC和anti‑CCR3‑PE的混合物。还公开了试剂盒的应用和其检测方法。本发明的试剂盒可以用于围术期过敏反应的检测，为改进围术期过敏反应诊疗提供新的方法，使过敏反应得到及时诊断，并对致敏原进行正确识别。

技术领域

本发明涉及过敏反应检测技术领域，具体涉及一种嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒、检测方法及其应用。

背景技术

近年来，随着麻醉过程中大量合成药物的广泛应用，临床中发现麻醉药物诱发的严重过敏反应(Anaphylaxis)也在逐年增高。资料显示，围术期过敏反应发生率介于1/20000～1/3500，更有报道认为发生率可达1/353，因此并非罕见。绝大多数患者的围术期致敏原无法明确，他们再次接受手术时依然要面临再次过敏的风险。目前，尚无麻醉过程中药物诱发严重过敏反应的标准化诊断体系，且国内外缺乏对其高危因素的系统研究。很多麻醉科医生对于围术期过敏反应的认识不足，从而出现诊疗不及时或错误。同时，由于致敏原的检测手段有限，绝大部分仅能凭借病史进行初步的判断。无论医生还是患者，对于改进围术期过敏反应诊疗的意愿都很迫切。

寻找检测围术期严重过敏反应致敏原的有效方法，对于指导患者再次手术用药，降低围术期风险意义重大。致敏原的检测方法分为体内法和体外法。体内法包括皮肤试验(Skin Test,ST)和激发试验等，体外试验包括组胺(Histamine)和类胰蛋白酶(Tryptase)水平检测、sIgE检测等。然而，目前尚无统一明确的围术期致敏原检测方法。

由于存在诱发严重过敏反应的风险，临床中无法采用激发试验(ProvocationTest,PT)这一金标准来确诊围术期致敏原，而ST是临床中致敏原检测最常用的手段，主要包括皮肤点刺试验法(SPT)和皮内试验法(IDT)。由于ST可通过非IgE途径直接刺激皮肤肥大细胞产生组胺而出现假阳性结果，因此目前对其检测致敏原的有效性有一定争议。另外，ST对操作和试验药物浓度要求较为严格，且存在一定的疼痛刺激及诱发全身过敏反应的风险，这些都限制了皮肤试验在围术期致敏原检测中的应用。

体外检测手段避免了患者暴露的风险的同时减少了其他的干扰因素，是皮肤试验有效的补充。sIgE检测是公认可靠的过敏性疾病体外检测方法，常用的检测手段有放射性变应原吸附试验(Radioallergosorbent Test，RAST)和ImmunoCAP系统等。ImmunoCAP系统是目前最先进的sIgE定量检测系统，它是在RAST基础上发展起来的荧光酶免疫检测法(RAST FEIA)，其检测原理是抗原或致敏原在固定相上与特定的人类抗体IgE结合，样品中的抗原与固定相上的抗原竞争性结合IgE，再将酶标抗IgE二抗加入到固有相中，最后测定荧光并与标准曲线比较。ImmunoCAP对sIgE的检测准确可靠，结果与临床相关性好。ImmunoCAP常用于食物和吸入性变应原的检测，具有较高的诊断敏感度和特异度，但其检测围术期过敏反应致敏原的相关资料很少，国内尚未开展相关研究。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒、检测方法及其应用，该试剂盒可以用于围术期过敏反应的检测，为改进围术期过敏反应诊疗提供新的方法，使过敏反应得到及时诊断，并对致敏原进行正确识别。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种嗜碱性粒细胞脱颗粒检测试剂盒，包括刺激缓冲液、刺激质控A、刺激质控B、染色试剂、溶解试剂和清洗缓冲液；所述刺激缓冲液包括钙离子、肝素和白介素3；所述刺激质控A为抗高亲和性IgE受体的单克隆抗体；所述刺激质控B为fMLP；所述染色试剂为anti-CD63-FITC和anti-CCR3-PE的混合物。