[发明专利]一种北豆根多糖及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及多糖技术领域，具体涉及一种北豆根多糖及其制备方法和应用。所述的北豆根多糖，其单糖组成为α‑D‑葡萄糖，其主链由33个(1→6)‑α‑D‑Glcp构成，在主链的其中一个(1→6)‑α‑D‑Glcp的C‑3位连有一个末端的α‑D‑Glcp。本发明所述的北豆根多糖，结构新颖，是首次分离得到，命名为RMP；其制备方法简单、适用，提取的多糖纯度高达95％以上。该产品能够显著增强RAW264.7细胞的吞噬能力及细胞上清液中IL‑6和TNF‑α的含量，可用于制备免疫调节剂及抗肿瘤(辅助)药物在临床上应用。

技术领域

本发明涉及多糖技术领域，具体涉及一种北豆根多糖及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，多糖受到越来越多的关注，人们逐渐认识到，多糖不仅限于提供能量、作为细胞骨架、传递信号等，大量来源于传统中药的天然多糖因具有显著的免疫增强活性，其中香菇多糖、黄芪多糖、人参多糖等已作为免疫调节剂及抗肿瘤(辅助)药物在临床上应用，效果显著。研究表明，多糖除具有免疫及抗肿瘤活性外，还具有抗氧化、抗病毒、抗突变、抗辐射等生物活性。

北豆根为防己科蝙蝠葛属多年生藤本植物蝙蝠葛(Menispermum dauricum DC)的干燥根茎。性味苦、寒，有清热解毒、祛风止痛的功效。北豆根含生物碱、多糖、醌类、强心苷类、内酯、皂苷、鞣质、蛋白质及树脂等多种化学成分。现代药理学实验表明，北豆根多糖对淋巴细胞具有丝裂原样作用，能增强小鼠巨噬细胞的吞噬功能，具有较强的免疫促进活性；并且北豆根多糖具有对抗和减轻致突变剂环磷酰胺和丝裂霉素C的抗突变作用。这些研究表明，作为免疫促进剂，北豆根多糖有望用于肿瘤患者的免疫治疗，或作为放化疗辅助药物，修复放疗化疗导致的免疫损伤。然而，由于多糖纯品制备困难，结构分析较为复杂，到目前为止，关于北豆根多糖的研究多为粗提物，未见有北豆根多糖的结构研究相关报道。

北豆根多糖是从北豆根(Rhizoma Menispermi)中分离获得的具有免疫增强活性的均一多糖组分，研究表明其在100～400μg/mL范围内能显著增强RAW264.7细胞的吞噬能力，且在10～400μg/mL范围内均可以显著增加细胞上清液中IL-6及TNF-α的含量，这说明RMP具有较强的免疫促进活性，有望作为免疫调节剂及抗肿瘤(辅助)药物用于临床治疗，关于北豆根多糖的结构及免疫活性研究在本发明完成之前没有相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有药用价值的北豆根多糖及其制备方法和应用。本发明的北豆根多糖，结构新颖，是首次分离得到，命名为RMP；其制备方法简单、适用，提取的多糖纯度高达95％以上。该产品可用于制备免疫调节剂及抗肿瘤(辅助)药物在临床上应用。

本发明采用以下技术方案：

一种北豆根多糖，其单糖组成为α-D-葡萄糖，其主链由33个(1→6)-α-D-Glcp构成，在主链的其中一个(1→6)-α-D-Glcp的C-3位连有一个末端的α-D-Glcp，其结构式如下：

所述的北豆根多糖中末端葡萄糖、(1→6)-α-D-葡萄糖和(1→3，6)-α-D-葡萄糖的组分摩尔比为2.74:31.27:1；

所述的北豆根多糖，重均分子量为6.16×10³Da。

本发明还提供了所述北豆根多糖的制备方法，包括以下步骤：

(1)水提：取北豆根药材，加蒸馏水，85℃-90℃提取3次，滤过，合并滤液，浓缩，加乙醇至乙醇体积含量为80％，静置24h，离心，得北豆根总多糖粗品；

(2)去蛋白：将步骤(1)所得的总多糖粗品溶于蒸馏水中，得北豆根总多糖粗品水溶液，然后向其中加入三氯乙酸-正丁醇溶液，振摇，静置，取下层溶液，真空除去溶剂，得到去蛋白后的多糖水提液，冻干得到北豆根粗多糖；三氯乙酸-正丁醇溶液的加入体积为北豆根总多糖粗品水溶液体积的1.8倍；