[发明专利]一株禽腺病毒毒株及其在制备全病毒抗体ELISA检测试剂盒中的应用

说明书

本发明提供了一株禽腺病毒毒株及其在制备全病毒抗体ELISA检测试剂盒中的应用。本发明的禽腺病毒名称为FAdV‑GX1908，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.19999。本发明的检测试剂盒包括禽腺病毒名称为FAdV‑GX1908全病毒经灭活包被的酶标板、血清稀释液、工作浓度的兔抗鸡HRP酶标抗体、阳性对照、阴性对照、TMB显色液及终止液。本发明的建立的检测试剂盒可快速、灵敏、特异地检测鸡血清中腺病毒4型抗体，该方法稳定、准确性高、操作简便，成本低廉，适用于鸡群感染状况监测和疫苗接种后有效性评估，为临床检测和疫病有效防控提供技术支撑。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一株禽腺病毒毒株及其在制备全病毒抗体ELISA检测试剂盒中的应用。

背景技术

禽腺病毒(Fowl adenovirus，FAdV)是无囊膜的双链DNA病毒，直径70～90nm，核衣壳呈20面对称结构。禽腺病毒分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ3个群，是家禽和野禽常见的传染病病原之一。其中，Ⅰ群病毒自然宿主和实验宿主广泛，不仅感染鸡，也在火鸡、鸭、鹅、鸽子、鸵鸟等野生禽类分离到该病毒，引起多种家禽或野禽的临床和病理症候群，包括心包积水综合征、肌胃糜烂症、包涵体肝炎等症状。

FAdV外壳由240个六邻体(hexon)、12个五邻体(penton base)和纤维蛋白三部分构成。目前已知FAdVⅠ群分为A、B、C、D、E 5个种，根据血清交叉中和反应又分为12个血清型；A种包括血清1型，B种包括血清5型，C种包括血清4型和血清10型，D种包括血清2、3、9和11型，E种包括血清6、7、8a和8b型。其中，血清型4型能引起肝脏黄染、肿大和出血为特征的传染病，剖检以心包积液或心包内胶冻状物为特征，伴肝脏坏死，病鸡表现为突然发病迅速死亡，死亡率达30％～90％。该病首次于1987年在巴基斯坦的安卡拉地区发生，又名安卡拉病，随后在亚洲、南美洲等地区流行。2013年以来该病在我国河南、山东、江苏、云南、陕西等地大面积流行，给家禽养殖业造成巨大的经济损失。

发明内容

本发明的目的是提供一株禽腺病毒毒株及其在制备全病毒抗体ELISA检测试剂盒中的应用。

本发明从鸡肝组织中分离，并经传代纯化获得一株禽腺病毒(Fowl adenovirus)毒株，将禽腺病毒接种鸡肝传代细胞进行培养，24-36小时出现典型的细胞病变，待细胞病变达到90％-95％，收获培养物，反复冻融3次，依据ReedMuench方法测定病毒毒价为10^9.5-10.5TCID₅₀/mL。所述禽腺病毒毒株的名称为FAdV-GX1908，于2020年06月22日中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCC No.19999。

所述禽腺病毒FAdV-GX1908在制备用于预防禽腺病毒病的疫苗中的应用也属于本发明的保护范围

所述禽腺病毒FAdV-GX1908还可以制备用于诊断禽腺病毒病的试剂，该应用也属于本发明的保护范围。

本研究于利用禽腺病毒毒株FAdV-GX1908作为包被抗原，通过一系列条件的优化，建立禽腺病毒毒株FAdV-GX1908全病毒抗体间接ELISA检测试剂盒。

基于此，本发明提供一种禽腺病毒的全病毒抗体ELISA检测试剂盒，包括灭活的禽腺病毒FAdV-GX1908全病毒包被的酶标板和酶标二抗；所述禽腺病毒FAdV-GX1908在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.19999。