[发明专利]一种降解阿维菌素的苍白杆菌AVM-2及其在水产养殖中的应用

权利要求书

1.一种降解阿维菌素的苍白杆菌AVM-2，其特征在于：从受农药污染的中华绒螯蟹养殖池塘的底泥土壤中分离纯化出一株以阿维菌素为唯一碳源的生长的菌株，该菌株利用阿维菌素作为碳源进行生长，菌株有降解能力，命名为AVM-2，通过形态学、生理生化特性、16SrDNA鉴定确定其属于苍白杆菌。

2.一种权利要求1所述降解阿维菌素的苍白杆菌AVM-2在水产养殖中的应用，其特征在于步骤为：

第一步，接种量、pH值、温度、农药初始浓度对菌株降解能力的影响：苍白杆菌AVM-2菌株在低菌量时，对阿维菌素的降解效率随接种量增大而升高，当细菌接种浓度为4×10⁶ CFU/mL时，阿维菌素的降解效率最高，达到32.1%，随后随着细菌接种浓度的增加，阿维菌素的降解率下降并趋于稳定，随着农药初始浓度增加，苍白杆菌AVM-2的降解率逐渐降低；

第二步：当阿维菌素浓度为60 mg/L时，苍白杆菌AVM-2 3 d降解率最高，达到33.59%，随底物浓度增加，降解效果被抑制，当阿维菌素浓度为240 mg/L时，3 d降解率为25.71%；

第三步，测定pH值对苍白杆菌AVM-2的降解率影响：在强酸或强碱条件下，降解效果较差，当pH 为5、6、10时，3 d降解效率分别为8.64%、11.23%和10.06%，当pH 为7时，3 d降解率最高为33.15%，随着环境偏碱性后，菌株的降解效率也开始呈现降低趋势，当pH为8时，降解效率显著降低，为31.32%；

第四步，测定温度对苍白杆菌AVM-2的降解率影响：在30 ℃条件下，降解效果最好，3 d降解率最高为33.46%;当温度为20 ℃、25 ℃时，3 d降解效率分别为16.67%和22.19%，降解效率显著降低；

第五步，阿维菌素降解菌株AVM-2的应用：以添加阿维菌素5.0 mg/L的组为对照，中华绒螯蟹肝胰腺内的阿维菌素含量呈现先上升后降低的趋势，在第9 d时，肝胰腺内的阿维菌素含量达到最大值98.59±16.21 mg/kg，此后开始逐渐降低，到第18 d后，肝胰腺内阿维菌素残留量在检测限以下，在阿维菌素添加量为5.0mg/L、添加菌液为4×10⁶ CFU/mL的实验组中，阿维菌素的含量也呈现出了先上升后降低的趋势，在第9 d时，肝胰腺内的阿维菌素含量达到最大值为36.77±4.15 mg/kg，此后开始逐渐降低，18 d后，肝胰腺内未能检测到阿维菌素残留；差异性分析显示，加入苍白杆菌AVM-2的实验组中农药残留与对照组相比显著降低，苍白杆菌AVM-2对阿维菌素的降解率除第3 d外均在50%以上，第15d时降解率达到最高为65.99%；

第六步：以阿维菌素添加量为5.0 mg/L的组为对照组，检测到中华绒螯蟹肌肉组织内的阿维菌素含量也呈现出先上升后降低的趋势，与肝胰腺内农药残留检测到的趋势相一致，在第9 d时，肌肉组织中的阿维菌素含量最大达到24.69±1.02 mg/kg，此后肌肉组织中的阿维菌素含量开始逐步降低，到实验结束时达到最低值，为0.82±0.10 mg/kg，在添加农药及苍白杆菌AVM-2的实验组中，中华绒螯蟹肌肉中阿维菌素的含量也呈现出先上升再降低的趋势，差异性分析显示，加入降解菌后，实验组农药残留比对照组显著降低，第15 d时，降解效率最高，达到66.78%。

3.根据权利要求1所述的一种降解阿维菌素的苍白杆菌AVM-2，其特征在于：所述苍白杆菌AVM-2菌株在LB固体培养基上的形态呈圆形、略有凸起、乳白色、表面光滑;透射电镜下观察菌体呈杆状、有鞭毛;革兰氏染色菌株为革兰氏阴性菌;

生理生化实验显示该菌株硝酸盐还原表现为阳性，靛基质、V·P 实验、ONPG、蔗糖、棉籽糖、山梨醇、枸橼酸盐、木糖均为阴性。

4.根据权利要求1所述的一种降解阿维菌素的苍白杆菌AVM-2，其特征在于：所述苍白杆菌AVM-2菌株的生长较快，于3 h进入对数生长期，在15 h进入平台期。

5.根据权利要求1所述的一种降解阿维菌素的苍白杆菌AVM-2，其特征在于：所述以AVM-2菌株的总DNA为模板，用细菌16S rDNA通用引物进行PCR 扩增，得到长度约为1500 bp的扩增产物，将菌株测得的16SrDNA序列在GenBank数据库中利用BLAST进行比对分析，发现该序列与Ochrobatrum sp.菌株的基因序列相似性达100%，分子生物学结合生理生化及形态特征，确认该菌株AVM-2为苍白杆菌属。