[发明专利]一种猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3型双重荧光定量PCR检测引物和探针、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3型双重荧光定量PCR检测引物和探针，其特征在于，包括引物和荧光探针；所述引物包括PRV gD real-F1、PRV gD real-R2、PCV3-real-F2和PCV3-real-R2；所述荧光探针包括PRV gD和PCV3；所述PRV gD real-F1、PRV gD real-R2、PRV gD、PCV3-real-F2、PCV3-real-R2和PCV3的核苷酸序列依次如SEQ ID No.1～6所示。

2.一种猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3型双重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物、探针和扩增试剂。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述扩增试剂包括Ex Taq Buffer、dNTP、Ex Taq酶和无RNA酶水。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述PRV gD real-F1、PRV gD real-R2、PCV3-real-F2和PCV3-real-R2的反应浓度均为0.6μmol/L；所述荧光探针PRV gD和PCV3的反应浓度均为0.4μmol/L。

5.一种猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3型双重荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：

1)提取组织样品病毒核酸；

2)将所述病毒核酸、权利要求2所述试剂盒中的引物、探针和扩增试剂混合获得反应体系；

3)将所述反应体系按照反应程序进行荧光定量PCR检测，收集荧光信号，检测样品中猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3型核酸；

所述反应体系以20μL计，包括以下组分：10X Ex Taq Buffer 2μL、dNTP 2μL、浓度为20μmol/L的PRV gD real-F1 0.6μL、浓度为20μmol/L的PRV gD real-R2 0.6μL、浓度为20μMol/L的PCV3-real-F2 0.6μL、浓度为20μmol/L的PCV3-real-R2 0.6μL，浓度为10μmol/LPRV gD 0.8μL、浓度为10μmol/L PCV3 0.8μL、Ex Taq酶0.1μL，病毒核酸2μL和无RNA酶水9.9μL；

所述反应程序如下：95℃2min；98℃10s，56℃30s，72℃，30s，45个循环；72℃收集荧光。