[发明专利]一种猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3型双重荧光定量PCR检测引物和探针、试剂盒及方法

说明书

本发明提供了一种猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3型双重荧光定量PCR检测引物和探针、扩增试剂及方法，属于病毒检测技术领域，所述引物探针包括引物PRV gD real‑F1、PRV gD real‑R2、PCV3‑real‑F2、PCV3‑real‑R2、荧光探针PRV gD和PCV3，所述PRV gD real‑F1、PRV gD real‑R2、PRV gD、PCV3‑real‑F2、PCV3‑real‑R2和PCV3的核苷酸序列依次如SEQ ID No.1～6所示。本发明提供的引物探针、扩增试剂和方法对猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3型的检测具有良好的敏感性、特异性、重复性和稳定性。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，尤其涉及一种猪伪狂犬病毒和猪圆环病 毒3型双重荧光定量PCR检测引物和探针、试剂盒及方法。

背景技术

猪伪犬病毒严重危害养猪业，快速、准确对该病原体进行鉴别诊 断，有助于该类动物疫病的预防和控制，对畜牧业的健康发展具有积 极的意义。猪圆环病毒3型是近年来新发现的猪病原体，可引起母猪 繁殖障碍和引起猪只出现厌食、多发性丘疹和浅表皮炎等症状。

目前虽然针对猪伪犬病毒和猪圆环病毒3型建立了相关的PCR和荧光 定量PCR检测方法，但尚未见到基于TaqMan探针的猪伪犬病毒和猪圆环病 毒3型双重荧光定量PCR检测方法。且当前猪伪犬病毒和猪圆环病毒3型 双重PCR检测方法存在着敏感性低和易污染等缺点。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3型 双重荧光定量PCR检测引物和探针、试剂盒及方法；可同时检测猪伪犬病 毒和猪圆环病毒3型，有效解决了当前猪伪犬病毒和猪圆环病毒3型双重 PCR检测方法敏感性低和易污染等缺点及单重荧光定量PCR只能检测一种 病原体的缺点。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3型双重荧光定量PCR 检测引物和探针，包括引物和荧光探针，所述引物包括PRV gD real-F1、PRV gD real-R2、PCV3-real-F2和PCV3-real-R2；所述荧光探针包括PRV gD和 PCV3；所述PRV gD real-F1、PRV gDreal-R2、PRV gD、PCV3-real-F2、 PCV3-real-R2和PCV3的核苷酸序列依次如SEQ ID No.1～6所示。

本发明提供了一种猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3型双重荧光定量PCR 检测试剂盒，包括所述的引物、探针和扩增试剂。

所述扩增试剂包括Ex TaqBuffer、dNTP、Ex Taq酶和无RNA酶水。

优选的，所述引物PRV gD real-F1、PRV gD real-R2、PCV3-real-F2和 PCV3-real-R2的反应浓度为0.6μmol/L；所述荧光探针PRV gD和PCV3的 反应浓度为0.4μmol/L。

本发明提供了一种非诊断目的的猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3型双重荧 光定量PCR检测方法，包括以下步骤：

1)提取组织样品病毒核酸；

2)将所述病毒核酸、所述的引物、探针和扩增试剂混合获得反应体系；

3)将所述反应体系按照反应程序进行荧光定量PCR检测，收集荧光信 号，检测样品中猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3型核酸；