[发明专利]一种酵母重组菌及其在减少蛋鸡盲肠氨气产生中的应用

权利要求书

1.酵母重组菌在减少蛋鸡盲肠氨气产生中的应用，其特征在于，所述酵母重组菌含有谷氨酸脱氢酶基因gdhA和谷氨酰胺合成酶基因glnA，是将含有gdhA基因和glnA基因的重组表达载体转化毕赤酵母GS115菌株后得到；

所述的重组表达载体，其基底载体为pPICZA质粒，通过如下方法构建得到：

合成引物GDH(F)、GDH(R)和GS(F)、GS(R)，并在gdhA基因的上下游分别添加EcoR I和Kpn I酶切位点序列，在glnA基因的上下游分别添加Kpn I和Not I酶切位点序列；

以屎肠球菌和凝结芽孢杆菌作为模板，以GDH(F)和GDH(R)作为引物合成gdhA基因序列，以GS(F)和GS(R)作为引物合成glnA基因序列，进行PCR反应；

将pPICZA质粒转化进DH5α感受态细胞中；将已转化的DH5α感受态细胞均匀涂布到博来霉素浓度为50μg/mL的LB固体培养基中，于37℃的生化培养箱内倒置培养12-16h；挑取含有pPICZA质粒的DH5α单菌落于Zeocin浓度为50μg/mL的LB液体培养基中，置于37℃的摇床200rpm振荡培养过夜；取2μL菌液为模板，引物为酵母表达载体的通用引物5’AOX和3’AOX，进行PCR反应；

使用EcoR I酶和Kpn I酶双酶切gdhA扩增产物；使用Kpn I酶和Not I酶双酶切glnA扩增产物；使用EcoR I酶和Not I酶双酶切pPICZA载体；将配好的体系混匀离心、37℃水浴酶切过夜，双酶切后切下目的条带，使用DNA胶回收试剂盒回收目的基因；将gdhA基因与glnA基因双酶切产物连成目的大片段，目的大片段连入pPICZA载体，形成重组载体pPICZA-gdhA/glnA；

所述的重组表达载体经线性化处理后转化毕赤酵母GS115菌株；

在向蛋鸡喂食饲料的同时，喂食经过诱导表达的所述的酵母重组菌菌液；

所述诱导表达的条件是：菌液接种量2％、摇瓶装液量为10％、2％的甲醇添加量、诱导表达5天。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：在体外模拟蛋鸡盲肠发酵底物的产气试验中，每500mg发酵底物搭配3mL经过诱导表达的所述的酵母重组菌菌液。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的发酵底物为蛋鸡饲料。