[发明专利]一种同时检测树舌灵芝子实体中六种三萜化合物的方法

权利要求书

1.一种同时检测树舌灵芝子实体中六种三萜化合物的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

(1)树舌灵芝子实体的预处理步骤：将树舌灵芝子实体加入有机溶剂超声提取，取上清液，过滤，得到的滤液即为样品溶液；配制六个树舌环氧酸类化合物的混合标准品溶液；

(2)超高效液相色谱检测步骤：对待测样品溶液和六个树舌环氧酸类化合物进行超高效液相色谱分离，以获得较好的分离度；

(3)化合物质谱信息获得步骤：利用质谱优化软件Agilent Optimizer，对六个树舌环氧酸类化合物进行母离子扫描、子离子对的检出以及最佳碰撞能的寻找；

(4)超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用分析方法建立步骤：在数据采集软件Agilent MassHunter Data Acquisition中，在超高效液相色谱分析条件和三重四级杆质谱检测条件下，导入保留时间，母离子、子离子对，建立六个树舌环氧酸类化合物的DMRM分析测定方法，同时，对不同浓度的混合标准品溶液和样品溶液进行上样测定；

（5）数据分析步骤：运用定量分析软件Agilent MassHunter Quantitative Analysis，创建六个树舌环氧酸类化合物的标准曲线，对所建方法进行方法学验证，并对树舌灵芝子实体样品溶液进行定量分析；

其中所述的六种三萜化合物为：树舌环氧酸H、树舌环氧酸A、树舌环氧酸G、树舌环氧酸C、树舌环氧酸E和树舌环氧酸F；

其中步骤（2）中超高效液相色谱分离的色谱条件为：选用Agilent ZORBAX SB-AqC-18，2.1mm×100mm, 1.8μm；检测波长：252nm；柱温：30℃；上样量为5uL；流速：0.3mL/min；流动相：乙腈-0.01%醋酸水；洗脱程序：0-1min，乙腈：20%-20%；1-3min，乙腈：20%-40%；3-12min，乙腈：40%-60%；12-13min，乙腈：60%-100%。

2.根据权利要求1所述的同时检测树舌灵芝子实体中六种三萜化合物的方法，其中通过质谱优化软件Agilent Optimizer，获得步骤（3）中分析所需各化合物的保留时间、母离子、子离子对及碰撞能信息如下：

树舌环氧酸H：保留时间：4.83min；母离子：529.3；定量离子：128.9，碰撞能：21；定性离子：399.2，碰撞能21；

树舌环氧酸A：保留时间：5.40min；母离子：511.3；定量离子：467.2，碰撞能：29；定性离子：257.0，碰撞能37；

树舌环氧酸G：保留时间：6.27min；母离子：527.3；定量离子：129.0，碰撞能：33；定性离子：397.1，碰撞能17；

树舌环氧酸C：保留时间：6.89min；母离子：525.2；定量离子：128.9，碰撞能：13；定性离子：395.2，碰撞能17；

树舌环氧酸E：保留时间：7.21min；母离子：511.0；定量离子：257.0，碰撞能：37；定性离子：467.2，碰撞能29；

树舌环氧酸F：保留时间：7.62min；母离子：509.2；定量离子：491.2，碰撞能：17；定性离子：447.1，碰撞能25。

3.根据权利要求1所述的同时检测树舌灵芝子实体中六种三萜化合物的方法，其中步骤（4）中，以超高效液相色谱—三重四级杆质谱联用为分析检测仪器，其中超高效液相色谱分离的色谱条件为：选用Agilent ZORBAX SB-AqC-18，2.1mm×100mm, 1.8μm；检测波长：252nm；柱温：30℃；上样量为5uL；流速：0.3mL/min；流动相：乙腈-0.01%醋酸水；洗脱程序：0-1min，乙腈：20%-20%；1-3min，乙腈：20%-40%；3-12min，乙腈：40%-60%；12-13min，乙腈：60%-100%；质谱条件为：电喷雾电离源AJS ESI作为离子源，检测在负离子模式下进行，选用动态多反应监测DMRM，毛细管电压：3000V，毛细管出口电压：380V；干燥气流速：14L/min，干燥气温度：200℃，鞘气温度：300℃，鞘气流速：11L/min，喷嘴电压: 1500V。