[发明专利]一种同时检测树舌灵芝子实体中六种三萜化合物的方法

说明书

本发明提供了一种同时检测树舌灵芝子实体中六种三萜化合物的方法，该方法包括以下步骤：(1)树舌灵芝子实体的预处理步骤；(2)超高效液相色谱检测步骤；(3)化合物质谱信息获得步骤；(4)超高效液相色谱‑三重四级杆质谱联用分析方法建立步骤；(5)数据分析步骤。本发明的同时检测树舌灵芝子实体中六种三萜化合物的方法，运用超高效液相色谱‑三重四级杆质谱联用，建立了一种可以痕量检测树舌灵芝子实体中6个三萜类化合物的方法，实现了对树舌灵芝子实体中特定三萜的精确测定。

技术领域

本发明涉及食品药品分析领域，具体的说涉及一种同时检测树舌灵芝子实体中六种三萜化合物的方法。

背景技术

树舌灵芝，是多孔菌科(Polyporaceae)灵芝属(Ganoderma sp.)下树舌亚属多个种的统称，常见的树舌灵芝有Ganoderma lobatum、Ganoderma Applanatum、Ganodermaaustrale等。树舌灵芝的多个种在民间有药用历史，且目前已有少量的人工栽培，但尚缺乏科学系统的研究。

研究发现，树舌灵芝中三萜有树舌环氧酸H(Applanoxidic acid H)，树舌环氧酸A(Applanoxidic acid A)，树舌环氧酸G(Applanoxidic acid G)，树舌环氧酸C(Applanoxidic acid C)，树舌环氧酸E(Applanoxidic acid E)，树舌环氧酸F(Applanoxidic acid F)等树舌环氧酸类化合物，种类少但含量高，其具有较强的抑制肿瘤细胞增殖的能力。

此前，关于树舌灵芝中三萜种类和含量的测定，多采用高效液相-紫外检测法进行初步分析。在同样条件下，树舌灵芝中树舌环氧酸类三萜化合物与赤芝中灵芝酸、灵芝烯酸类三萜化合物会有相同的保留时间，因此，无法对树舌灵芝和赤芝中不同的三萜作出准确区分。因此，需要建立一种更为精确的检测树舌灵芝中树舌环氧酸类三萜化合物的分析方法。

发明内容

本发明提供了一种同时检测树舌灵芝子实体中六种三萜化合物的方法，该方法包括以下步骤：

(1)树舌灵芝子实体的预处理步骤：将树舌灵芝子实体加入有机溶剂超声提取，取上清液，过滤，得到的滤液即为待测样品溶液；配制六个树舌环氧酸类化合物的混合标准品溶液；

(2)超高效液相色谱检测步骤：对待测样品溶液和六个树舌环氧酸类化合物的混合标准品溶液进行超高效液相色谱分离，以获得较好的分离度；

(3)化合物质谱信息获得步骤：利用质谱优化软件(Agilent Optimizer)，对六个树舌环氧酸类化合物进行母离子扫描、子离子对的检出以及最佳碰撞能的寻找；

(4)超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用分析方法建立步骤：在数据采集软件(Agilent MassHunter Data Acquisition)中，在超高效液相色谱分析条件和三重四级杆质谱检测条件下，导入保留时间，母离子、子离子对，建立六个树舌环氧酸类化合物的DMRM分析测定方法，同时，对不同浓度的混合标准品溶液和样品溶液进行上样测定；

(5)数据分析步骤：运用定量分析软件(Agilent MassHunter QuantitativeAnalysis)，创建六个树舌环氧酸类化合物的标准曲线，对所建方法进行方法学验证，并对树舌灵芝子实体样品溶液进行定量分析。

优选的，步骤(1)中树舌灵芝子实体的预处理步骤为：先将树舌灵芝子实体完全干燥，然后进行浸提，其中浸提的条件为：

所用浸提液为甲醇、乙醇中的一种，优选甲醇；

提取方法为超声提取或60℃加热提取，优选超声提取；

提取时间为10-90min，优选60min；

料液比为1∶20--1∶40(重量g∶体积ml)，优选1∶30；