[发明专利]一种双信号输出的病原微生物快速检测方法

权利要求书

1.一种双信号输出的病原微生物快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将介孔硅与邻苯二胺混合，得到介孔中负载有邻苯二胺分子的介孔硅，记为产物A；

S2、采用待测病原微生物的核酸适配体封闭步骤S1所述产物A，得到产物B；

S3、将待测样品、核酸酶以及步骤S2所述产物B置于同一反应体系中，反应后离心取上清液；

S4、将步骤S3所述上清液与Ag⁺溶液混合，通过比色或荧光检测，对病原微生物的浓度进行定性和定量分析；

其中，所述介孔硅为表面修饰了氨基的介孔氧化硅纳米球，其粒径为50-200nm，孔径为2-4nm；所述核酸酶为双链DNA特异性核酸酶。

2.根据权利要求1所述的病原微生物快速检测方法，其特征在于，步骤S1所述产物A的制备方法为：将介孔氧化硅纳米球超声分散在Tris-HCl缓冲液中，搅拌条件下，逐滴加入邻苯二胺溶液后，室温反应4-6h，得到含有产物A的悬浮液；所述邻苯二胺溶液的溶剂为无水乙醇和Tris-HCl缓冲液的混合液。

3.根据权利要求2所述的病原微生物快速检测方法，其特征在于，所述无水乙醇与Tris-HCl缓冲液的体积比为1:1，所述邻苯二胺溶液的浓度为10-20mg/mL。

4.根据权利要求1所述的病原微生物快速检测方法，其特征在于，步骤S2所述产物B的制备方法为：将待测病原微生物的核酸适配体溶液加入到步骤S1所述悬浮液中，4℃温和振荡6-8h后，用Tris-HCl缓冲液多次离心和洗涤，得到产物B。

5.根据权利要求1所述的病原微生物快速检测方法，其特征在于，步骤S3所述过程具体为：将产物B重悬到Tris-HCl缓冲液中，再加入含有待测样品和双链DNA特异性核酸酶的混合液，室温反应20-30min后，离心得到上清液。

6.根据权利要求1所述的病原微生物快速检测方法，其特征在于，步骤S4所述Ag⁺溶液为含有AgNO₃的柠檬酸缓冲液，所述溶液中Ag⁺的浓度为0.01-0.1M，所述柠檬酸缓冲液的pH为4.5-5.5，浓度为0.05-0.1M。

7.根据权利要求1所述的病原微生物快速检测方法，其特征在于：步骤S4所述荧光检测的具体参数为：激发光波长为435nm，采谱范围为450-700nm，平均测量3-5次。

8.根据权利要求1所述的病原微生物快速检测方法，其特征在于，所述病原微生物为金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、单增李斯特菌、副溶血性弧菌、蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌中的任意一种。