[发明专利]一种基于镧系元素化学发光法长效生长激素免疫定量检测试剂盒及其方法

说明书

本发明涉及生物制药领域，特别是涉及一种基于镧系元素化学发光法长效生长激素免疫定量检测试剂盒及其方法。该试剂盒包括：PEG抗体、微孔板，生物素标记的PEG‑rhGH抗体工作液，链霉亲和素标记的镧系元素铕工作液，增强解离液，PEG‑rhGH抗原标准品和质控品。本发明经过方法学评估，结果显示试剂盒灵敏度高、特异性好，准确度更高，为满足长效生长激素药物临床分析和评价提供了一种技术手段。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，特别是涉及一种基于镧系元素化学发光法长效生长激素免疫定量检测试剂盒及其方法。

背景技术

生长激素(Growth Hormone，GH)是一种垂体分泌源的蛋白质，参与调节生长发育过程中的代谢，其缺乏可以导致儿童生长发育迟缓，成人则为生长激素缺乏综合征，重组人生长激素(rhGH)可以纠正上述症状。由于rhGH的半衰期短，需要每日皮下注射，大大增加了治疗者的痛苦。为了延长半衰期，长效重组生长激素药物成为目前生物技术药物的研发主流；从技术上讲，聚乙二醇(PEG)化技术是目前最重要的蛋白融合技术。

尽管长效生长激素(PEG-rhGH)药物进展迅速，但尚无检测其完整分子的免疫定量方法，市售试剂盒通常采用夹心酶联免疫吸附法，包被抗体和检测抗体均为抗GH的抗体，不能检测药物中PEG是否在体内仍与药物连接，且血清中含有内源性GH，易与包被板上抗GH的抗体结合，无法特异检测PEG-rhGH，反应PEG-rhGH在体内的代谢情况。如何选择包被抗体和检测抗体，特异性识别PEG-rhGH完整分子是本方法的难点。因此，生物技术药物领域的科研工作者迫切建立灵敏、特异的PEG-rhGH药物的定量检测方法并探索其可行性，从而满足此类药物临床分析和评价需求。

解离增强镧系荧光免疫分析法(Dissociation-enhanced lanthanidefluorescence immunoassay，DEFLIA)是基于时间分辨荧光分析法(Time-resolvedfluorometry，TRF)建立的微量免疫分析技术，其具体原理为：利用荧光发射体的荧光寿命差别，以镧系元素铕(Eu³⁺)为示踪剂，标记抗原或抗体，解离出来的铕(Eu³⁺)与特制的扩增液形成新的螯合物时，其荧光明显增强且持久，在检测时，用延迟测量的方法信号较紫外法更高，且不易受血清基质干扰，大大提高检测灵敏度。

对于PEG-rhGH检测，如何制备一种利用镧系元素化学发光测定技术、且可检测完成PEG-rhGH分子的试剂盒，是目前长效生长激素检测亟待解决的问题之一。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种基于镧系元素化学发光法长效生长激素免疫定量检测试剂盒及其方法。该方法可检测PEG-rhGH完整分子，特异性强，灵敏度高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种基于镧系元素化学发光法长效生长激素免疫定量检测试剂盒，该试剂盒包括：

PEG抗体、微孔板，生物素标记的PEG-rhGH抗体工作液，链霉亲和素标记的镧系元素铕工作液，增强解离液，PEG-rhGH抗原标准品和质控品。

本发明检测方法将抗PEG的抗体过量包被于微孔板上，向微孔板中加入待检的PEG-rhGH与其反应，再加入生物素标记的PEG-rhGH抗体，结合解离增强镧系荧光免疫分析法，检测荧光信号，信号的强度与样品中PEG-rhGH的量呈正相关。本发明利用解离增强镧系荧光免疫分析技术进行长效生长激素定量检测，检测时，捕获抗体为抗PEG的抗体，检测抗体为抗GH的抗体，可检测完整PEG-rhGH分子，同时避免了内源性GH干扰，可准确检测体内长效生长激素代谢情况，或者体外长效生长激素的稳定性。

作为优选，PEG-rhGH标准品为在0.1～150ng/mL范围内的一系列梯度浓度的标准品；

质控品为在2～100ng/mL范围内的高、中、低浓度的质控品。