[发明专利]沙蜇触手大、小刺丝囊的分离与毒液提取方法

权利要求书

1.一种沙蜇触手大、小刺丝囊的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：沙蛰触手样品的采集

沙蛰水母采集后，剪取其触手的红色部分，收集后保存在-80℃冰箱中；

S2：刺丝囊混合物提取

将沙蜇冷冻触手取出，捣碎后将匀浆液放置于4℃冰箱里，按比例加入4℃预冷的人工海水，搅拌自溶48h后，筛网过滤收集滤液，于4℃、1,000×g下离心，收集沉淀；

所述人工海水由速溶海水晶、双蒸水以及MgCl₂·6H₂O配置而成，所述速溶海水晶的浓度为34g/L，MgCl₂·6H₂O的浓度为5g/L，

S3：蔗糖溶液非连续密度梯度法初步分离

分别配置浓度为80％、70％、50％和20％的蔗糖溶液，按照高密度向低密度逐层放置的先后顺序，从下至上依次缓慢加入80％、70％、50％和20％的蔗糖溶液，在最上层缓慢加入与各浓度蔗糖溶液体积相同的重悬后沉淀样品，4℃、1,000×g，离心30min后，分别吸取50％层的小刺丝囊和80％层的大刺丝囊，海水清洗，并于显微镜制片观察，得到大刺丝囊粗分离样品和小刺丝囊粗分离样品；

S4：percoll溶液非连续密度梯度法细分

分别配置浓度为100％和30％的percoll溶液，使用吸管按照高密度向低密度逐层放置的先后顺序，从下至上依次缓慢加入100％和30％的percoll溶液，在最上层缓慢加入与各浓度percoll溶液体积相同的大刺丝囊粗分离样品或者小刺丝囊粗分离样品，4℃、1,000×g离心15min，在30％的percoll溶液中吸取得到小刺丝囊溶液，在100％的percoll溶液中吸取得到大刺丝囊溶液，海水清洗后得到小刺丝囊和大刺丝囊。

2.根据权利要求1所述的沙蜇触手大、小刺丝囊的分离方法，其特征在于：

其中，S2中，获得触手匀浆液的方法如下：将冷冻的沙蜇触手置于榨汁机的3/4处进行榨汁，每榨汁1min停20s，总时间为10min；

按照匀浆液质量与预冷人工海水体积1:1的比例，加入4℃预冷的人工海水，筛网目数为200。

3.根据权利要求1所述的沙蜇触手大、小刺丝囊的分离方法，其特征在于：

其中，S2中，搅拌自溶48h期间，每自溶12h，静置2h，倾倒部分上清，按体积比为1:1比例加入人工海水继续搅拌自溶除去杂质。

4.根据权利要求1所述的沙蜇触手大、小刺丝囊的分离方法，其特征在于：

其中，S3和S4中，进行海水清洗时，向刺丝囊溶液中加入5倍体积的人工海水，吹打均匀，于4℃、1,000g条件下离心5min，清洗刺丝囊沉淀，重复五次。