[发明专利]一种应用于AFP检测的RCQDs纳米探针溶液及其制备方法

权利要求书

1.一种应用于AFP检测的功能化RCQDs纳米探针溶液，其特征在于，该功能化RCQDs纳米探针溶液的制备方法包括如下步骤：

(1)RCQDs的制备：将新鲜枇杷叶洗净晾干后切成小块，取适量的枇杷叶浸入一定量无水乙醇中，连续搅拌4h，再在8000rpm转速下离心10min，得到透明的上层清液，采用旋转蒸发器对上层清液进行浓缩，直至出现浆体样品，将浆体样品置于烧杯中，采用700W功率微波炉加热5min得到残渣，残渣分散于超纯水中得分散液，分散液通过0.22μm滤膜过滤器进一步过滤得到含小粒径的RCQDs的滤液。

(2)RCQDs纳米探针溶液的制备：

取步骤(1)制备的RCQDs的滤液适量，加入一定比例的H₂N-PEG-NH₂无水乙醇溶液，充分混匀，再回流加热至120℃，并在氮气气氛下搅拌10h.溶液分层取上清液，将其通过0.22μm的无机滤膜过滤,滤液用透析膜(MWCO:2kDa)透析48h进行纯化得到纯的氨基化RCQDs溶液；再取透析后的氨基化RCQDs溶液按照一定比例与NHS和EDC混合，搅拌活化30min，再取1.5mL活化后的溶液加入100μL的100μmol/L一端修饰氨基的DNA单链，两者在37℃恒温摇床中混合30min，RCQDs上活化的羧基将与氨基进行共价偶联，接着加入100μL 30-80μmol/L修饰BHQ3的单链AFP-适配体，并在37℃恒温摇床中杂交45-75min，将复合物溶液转移至10kD超滤管中，在10000转/min下离心15min，加入Tris-HC1溶液，重复离心步骤三次，回收超滤管中溶液，得到功能化RCQDs纳米探针溶液。

2.如权利要求1所述的RCQDs纳米探针溶液，其特征在于，在(1)中所述枇杷叶与无水乙醇的比例为2g：5mL。

3.如权利要求2所述的RCQDs纳米探针溶液，其特征在于，在步骤(2)中所述RCQDs滤液与H₂N-PEG-NH₂无水乙醇溶液比例为30mL：0.2g。

4.如权利要求3所述的RCQDs纳米探针溶液，其特征在于，在步骤(2)中所述氨基化RCQDs溶液与NHS、EDC的混合比例为5mL：0.01g：0.1g。

5.如权利要求4所述的RCQDs纳米探针溶液，其特征在于，在步骤(2)中所述修饰BHQ3的单链AFP-适配体的溶度为70μmol/L。

6.如权利要求5所述的RCQDs纳米探针溶液，其特征在于，在步骤(2)中所述杂交时间为60min。