[发明专利]一种利用SpRY-Cas9系统制备CD163基因编辑猪的方法有效
| 申请号： | 202011243301.9 | 申请日： | 2020-11-10 |
| 公开（公告）号： | CN112094866B | 公开（公告）日： | 2021-05-11 |
| 发明（设计）人： | 沈秋平;李垲;孙照霖 | 申请（专利权）人： | 北京首农未来生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C12N15/12;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 白艳 |
| 地址： | 100088 北京市西*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 spry cas9 系统 制备 cd163 基因 编辑 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种制备CD163双等位基因突变细胞的方法，为对猪离体成纤维细胞基因组的CD163基因进行基因编辑，使双等位基因CD163的一条染色体第三外显子的第226-238位的GTCGAGGGAATGA缺失，另一条染色体第三外显子的第226-236位的GTCGAGGGAAT缺失，该基因的其他核苷酸序列不变，得到CD163双等位基因突变细胞；
所述第三外显子的核苷酸序列为序列2；
所述基因编辑采用SpRY-Cas9系统进行；
所述SpRY-Cas9系统包括cas9蛋白和sgRNA；
所述sgRNA的靶序列为序列3第1-20位；
所述cas9蛋白为序列6中自第20-4204位组成的核苷酸编码的蛋白；
所述SpRY-Cas9系统为由所述cas9蛋白mRNA和所述sgRNA组成；
所述cas9蛋白的mRNA为将由序列6中自第20-4204位组成的核苷酸序列转录为RNA；
所述sgRNA的核苷酸序列为序列8；
所述基因编辑为将所述cas9蛋白mRNA和所述sgRNA导入离体猪成纤维细胞系中，得到CD163双等位基因突变细胞。
2.一种制备CD163双等位基因突变猪的方法，为将权利要求1所述方法制备的所述CD163双等位基因突变细胞通过体细胞核移植入母猪体内，生产的子代即为CD163双等位基因突变猪。
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