[发明专利]一种快速鉴定禾谷镰刀菌产毒基因型的试剂盒和方法在审
| 申请号： | 202011247525.7 | 申请日： | 2020-11-10 |
| 公开（公告）号： | CN112280888A | 公开（公告）日： | 2021-01-29 |
| 发明（设计）人： | 王建华;杨宪立;陈玲巧;张静雅;杨俊花;赵志勇 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/77 |
| 代理公司： | 焦作加贝专利代理事务所(普通合伙) 41182 | 代理人： | 任昕 |
| 地址： | 201403 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 鉴定 禾谷 镰刀 菌产毒 基因型 试剂盒 方法 | ||
1.一种快速鉴定禾谷镰刀菌产毒基因型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含由引物ChemF和引物ChemR组成的引物组合，其中，所述引物ChemF和引物ChemR分别具有SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含DNA聚合酶、dNTPs和PCR缓冲液。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括对照品，所述对照品包括3A-DON型、15A-DON型和NIV型三种基因型的禾谷镰刀菌的核酸样本，或其利用引物ChemF和引物ChemR进行PCR扩增的扩增产物。
4.由引物ChemF和引物ChemR组成的引物组合在制备用于快速鉴定禾谷镰刀菌产毒基因型的试剂盒中的应用，其特征在于，所述引物ChemF和引物ChemR分别具有SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
5.一种快速鉴定禾谷镰刀菌产毒基因型的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
获取待鉴定禾谷镰刀菌的基因组DNA；
以所述DNA为模板，利用引物ChemF和引物ChemR进行PCR扩增；
检测PCR扩增产物，以确定禾谷镰刀菌产毒基因型，
其中，所述引物ChemF和引物ChemR分别具有SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示的核苷酸序列。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，利用测序法检测PCR扩增产物。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，利用琼脂糖凝胶电泳法检测PCR扩增产物。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，如果PCR扩增产物为886bp，则待鉴定禾谷镰刀菌为3A-DON型；如果PCR扩增产物为2207bp，则待鉴定禾谷镰刀菌为15A-DON型；如果PCR扩增产物为1509bp，则待鉴定禾谷镰刀菌为NIV型。
9.根据权利要求5-8任一所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的体系为：总体积20μL：2×EasyTaq PCR SuperMix 10μL，10μmol/L上游引物1μL，10μmol/L下游引物1μL，DNA模板50ng，ddH2O补至20μL。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：94℃预变性3min；94℃变性40s，62℃复性40s，72℃延伸2min，25个循环；72℃延伸5min。
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