[发明专利]一种快速鉴定禾谷镰刀菌产毒基因型的试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种快速鉴定禾谷镰刀菌产毒基因型的试剂盒和方法，属于分子生物学技术领域。所述试剂盒包含由引物ChemF和引物ChemR组成的引物组合，其中，所述引物ChemF和引物ChemR分别具有SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。所述方法包括针对所述引物组合对待测禾谷镰刀菌进行PCR扩增，并利用扩增产物的凝胶电泳结果判断其产毒基因型。本发明的引物组合重复性好，特异性高。本发明的方法准确性高，操作简单，适用于禾谷镰刀菌产毒基因型的快速鉴定。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体地，涉及一种快速鉴定禾谷镰刀菌产毒基因型的试剂盒和方法。

背景技术

小麦赤霉病是一种严重的植物病害，被称为小麦的“癌症”，在世界范围内广泛流行。我国长江中下游地区、华南地区以及东北地区等是小麦赤霉病的高发区。统计表明，2000-2018年，我国小麦赤霉病每年发生面积均超过450万公顷，约占当年全国小麦种植面积的20％-25％，每年造成的产量损失超过341万吨，2000-2018年累计造成直接经济损失超100亿元人民币。除了造成严重的产量损失，禾谷镰刀菌产生的真菌毒素可以引起人畜呕吐、腹泻等中毒症状，已成为影响粮食生产和食品安全的重大隐患。

禾谷镰刀菌是小麦赤霉病的主要病原菌，可以产生B型单端孢烯族毒素，包括脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和雪腐镰刀菌烯醇(NIV)，以及DON的乙酰化产物3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3A-DON)和15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15A-DON)。根据所产毒素类型的不同，禾谷镰刀菌菌株被划分为3A-DON型、15A-DON型和NIV型三种基因型。明确危害小麦禾谷镰刀菌的产毒类型对开展病害流行、防控及真菌毒素污染风险评估具有重要意义。传统方法是对禾谷镰刀菌进行培养后提取毒素，然后进行色质谱分析，通过化学检测明确菌株的产毒类型。然而，传统方法具有周期长、需要使用毒素标准品、需要配置价格昂贵的大型色质谱仪器设备等缺的。因此，基于DNA序列多态性，开发禾谷镰刀菌产毒基因型快速鉴定方法，对进行小麦等谷物中真菌毒素污染风险评估及有针对性地开展病害及毒素污染防控工作具有重要意义。