[发明专利]一种对目标基因进行干扰的系统和方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体而言，提供了一种对目标基因进行干扰的系统和方法。本发明提供的对目标基因进行干扰的系统，包括dCpf1‑PS融合蛋白、具有PS转座酶识别序列对的Donor载体，以及引导RNA。可以实现转基因序列的精确整合，实现外源基因的插入或目标基因的干扰。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种对目标基因进行干扰的系统和方法。

背景技术

转座子是一段在宿主基因组中可以自由移动或者跳跃的DNA序列，转座子移动或者跳跃的过程被称为转座。转座子高效的转座特征使其在转基因、基因治疗和基因功能研究等领域显示巨大的应用潜力。转座子技术的重要应用之一就是高效介导体细胞和生殖细胞的转基因。转座子介导的转基因技术具有整合效率高，承载容量大，可同时携带多个基因，且转基因以单拷贝形式整合，转入的基因表达稳定，易于确定真伪位点等优点。转座子介导的转基因技术的不足是转座整合位点具有随机性，可能会插入到宿主功能基因内部，影响功能基因表达。

Cpf1蛋白是在CRISPR系统研究中发现的新成员，与CRISPR/Cas9系统相比，CRISPR/Cpf1与其功能类似但是结构更简单、更精准，并能克服CRISPR/Cas9系统在应用中的一些限制，与Cas9比较，Cpf1的引导RNA更短，但引导序列(即DNA靶位点)更长(～24nt)。因此，CRISPR/Cpf1系统在基因编辑领域有着广阔的应用前景。然而CRISPR/Cpf1系统介导的定点整合效率还有待进一步提高。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种对目标基因进行干扰的系统。

本发明的第二目的在于提供上述系统的应用。

本发明的第三目的在于提供一种对目标基因进行干扰的方法。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种对目标基因进行干扰的系统，包括dCpf1-PS融合蛋白、具有PS转座酶识别序列对的Donor载体，以及引导RNA。

进一步地，所述Donor载体在PS转座酶识别序列对之间含有剪切受体序列，报告基因或其它外源基因，以及转录终止序列；

优选地，所述报告基因为增强型绿色荧光蛋白编码序列和新霉素抗性基因编码序列；

优选地，转录终止序列包括SV40终止子或BGH终止子；

优选地，PS转座酶识别序列对的序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示：

CCGTATTTTCCGCACTATAAGGCGCACC(SEQ ID NO.1)；

GGTGCGCCTTATAGTGCGGAAAATACGG(SEQ ID NO.2)；

优选地，PS转座酶识别序列对之间依次为剪切受体序列、增强型绿色荧光蛋白编码序列、T2A自剪切肽编码序列、新霉素抗性基因编码序列和SV40终止子。

优选地，所述Donor载体的转基因序列如SEQ ID NO.3所示。

进一步地，所述Donor载体在PS转座酶识别序列对的两侧分别含有目标基因的同源臂序列；

优选地，所述同源臂序列位于目标基因的内含子区域。

进一步地，所述目标基因为猪ROSA26基因；

优选地，所述引导RNA序列如SEQ ID NO.4所示：

AATTTCTACTAAGTGTAGATGCCCTGGCTTAACCTGATTCTTGG(SEQ ID NO.4)。