[发明专利]一种鸡爪槭新品种组培再生体系的建立方法

权利要求书

1.一种鸡爪槭新品种组培再生体系的建立方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤S001、创造组培条件

向培养基中添加蔗糖20g/L，琼脂5g/L，调整培养基pH值至5.7，并调节组培环境光照强度为100μmol/m2/s，光周期为16h/8h，温度为25±2℃；

步骤S002、外植体消毒

将采集到的鸡爪槭外植体当年生枝条剪去叶片，切取约3cm的带芽茎段，用洗洁剂清洗，然后流动清水冲洗1h，再用75％酒精以及0.1％氯化汞交互式消毒分别不低于5min，同时添加0.2％的聚氧乙烯山梨糖醇酯，消毒完毕后再使用无菌水漂洗3次，最后在无菌滤纸上晾干表面水分；

步骤S003、启动培养

将上述步骤S002中消毒处理后获得的无菌外植体分别接种到含有IAA、IBA、NAA、6-BA、TDZ不同生长素的培养基中，培养45d后，统计腋芽诱导率，观察腋芽萌动及后续生长状况；

步骤S004、增殖培养

将生长状况良好且长约1cm的腋芽剪下，放入含有细胞分裂素6-BA或KT与生长素IBA或NAA混合的培养基中，培养45d后统计平均增殖系数；

步骤S005、生根培养

将经过上述步骤S004增殖培养获得的约1cm丛生芽分别剪下，转移到含有不同浓度生长素IAA(0.1、0.2、0.3、0.4和0.5mg/L)、IBA(0.1、0.2、0.3、0.4和0.5mg/L)和NAA(0.1、0.2、0.3、0.4和0.5mg/L)配比的培养基中，培养30d后统计生根数及平均根长。

2.根据权利要求1所述的一种鸡爪槭新品种组培再生体系的建立方法，其特征在于，对经过所述步骤S004增殖培养后的腋芽进行羧苄青霉素抗性试验，该实验方式如下：选取增殖培养基上获得的生长状况良好的健壮不定芽接种到含有不同浓度Carb(0、100、200、300、400、500、600和700mg/L)的增殖培养基中，培养45d后统计不定芽的诱导率及平均增殖系数，同时观察不定芽的成活率及生长状况。

3.根据权利要求1所述的一种鸡爪槭新品种组培再生体系的建立方法，其特征在于，对经过所述步骤S004增殖培养后的腋芽进行羧苄青霉素抗性试验，该实验方式如下：选取增殖培养基上获得的生长状况良好的健壮不定芽接种到含有不同浓度Hyg的(0、2.5、5、7.5、10、12.5、15和17.5mg/L)增殖培养基中，培养45d后统计不定芽的增值率及增殖系数，同时观察不定芽的成活率及生长状况。每个处理重复3次，每个处理50个芽。

4.根据权利要求2所述的一种鸡爪槭新品种组培再生体系的建立方法，其特征在于，当Carb浓度为700mg/L或者Hyg浓度为10mg/L时，丛生芽停止增殖。