[发明专利]一种鸡爪槭新品种组培再生体系的建立方法

说明书

本发明涉及组培技术领域，具体公开了一种鸡爪槭新品种组培再生体系的建立方法，其特征在于，该方法包括步骤S001.创造组培条件、S002.外植体消毒、S003.启动培养、S004.增殖培养、S005.生根培养等五个步骤。通过上述五个步骤建立组培再生技术体系，以当年生枝条为外植体，75％酒精消毒40s，0.1％氯化汞消毒20min，流水冲洗后接种到培养基上进行启动培养，诱导腋芽萌发。将萌发的腋芽切下，接种到培养基上进行增殖培养，诱导产生丛生芽。通过不定芽对羧苄青霉素和潮霉素的敏感性的研究，发现当Carb浓度为700mg/L或者Hyg浓度为10mg/L时，丛生芽基本停止增殖。

技术领域

本发明涉及植物组培技术领域，特别是指一种鸡爪槭新品种‘金陵丹枫’ 组培再生体系的建立方法。

背景技术

‘金陵丹枫’是槭树科槭属鸡爪槭(Acer palmatum)的一个园艺新品种， 由江苏省农业科学院经过多年选育而成。其叶片掌状5～7裂，叶片边缘具有重 锯齿，叶基部近心脏形，新叶为亮红色，观赏期长达100余天。由本案发明人 自主创新选育的新品种‘金陵丹枫’已获得植物新品种权证书与江苏省林木良 种认定证书。该新品种‘金陵丹枫’可孤植，群植或作为高档盆栽用，具有极 高的观赏和应用价值。

在‘金陵丹枫’种苗的生产中，通常采用嫁接的方式，但是嫁接成活率受 多种外界因素影响较大，如砧木和接穗的质量，嫁接季节和温湿度等，不利于 大规模生产。‘金陵丹枫’扦插不易生根，繁殖较困难。因此亟待建立‘金陵 丹枫’的组培再生体系，解决批量生产的问题。目前国内虽有少量鸡爪槭品种 已建立了组培再生体系，如‘金陵黄枫’，‘赤枫’，‘日本红枫’等，但是 不同品种的鸡爪槭对不同培养基和植物激素的适应性差异很大，还需要针对不 同品种细致研究其适宜的组培繁殖技术。

本发明以自主创新选育的新品种‘金陵丹枫’当年生枝条作为外植体，通 过启动培养，增殖培养和生根培养等阶段，筛选最适宜‘金陵丹枫’生长的激 素浓度。我们还研究了‘金陵丹枫’不定芽对不同浓度的羧苄青霉素 (Carbenicillin，Carb)和潮霉素(Hygromycin，Hyg)的敏感性，以期为‘金 陵丹枫’转基因体系的建立提供依据。

发明内容

本发明实施方式的目的在于提供一种鸡爪槭新品种‘金陵丹枫’组培再生 体系的建立方法，该方法包括以下步骤：

步骤S001、创造组培条件

向培养基中添加蔗糖20g/L，琼脂5g/L，调整培养基pH值至5.7，并调 节组培环境光照强度为100μmol/m2/s，光周期为16h/8h，温度为25±2℃；

步骤S002、外植体消毒

将采集到的鸡爪槭外植体当年生枝条剪去叶片，切取约3cm的带芽茎段， 用洗洁剂清洗，然后流动清水冲洗1h，再用75％酒精以及0.1％氯化汞交互式 消毒分别不低于5min，同时添加0.2％的聚氧乙烯山梨糖醇酯，消毒完毕后再使 用无菌水漂洗3次，最后在无菌滤纸上晾干表面水分；

步骤S003、启动培养

将上述步骤S002中消毒处理后获得的无菌外植体分别接种到含有IAA、 IBA、NAA、6-BA、TDZ不同生长素的培养基中，培养45d后，统计腋芽诱导率， 观察腋芽萌动及后续生长状况；

步骤S004、增殖培养

将生长状况良好且长约1cm的腋芽剪下，放入含有细胞分裂素6-BA或KT 与生长素IBA或NAA混合的培养基中，培养45d后统计平均增殖系数；

步骤S005、生根培养