[发明专利]一种蒜薹多糖及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种蒜薹多糖的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)将新鲜蒜薹压榨成汁，获得蒜薹汁；蒜薹汁进行高压热水提取，对提取液进行醇沉，将沉淀物冷冻干燥，获得第一提取物；步骤1)中所述高压热水提取的温度为100～125℃；

2)将第一提取物溶于水中，加入Sevag试剂进行脱蛋白处理，收集上层清液，浓缩，冷冻干燥，获得脱蛋白的粗多糖即第二提取物；所述Sevag试剂为体积比为4:1的氯仿和正丁醇的混合物；

3)脱色处理：将脱蛋白的粗多糖溶于水中，加入双氧水，调节pH至中性，加热反应，浓缩，冷冻干燥，获得脱蛋白脱色的粗多糖，记为cGBP；

4)DEAE纤维素阴离子交换柱层析：将cGBP溶于水，离心，取上清液，置于DEAE纤维素阴离子交换层析柱中，依次用0、0.1、0.2、0.3和0.4mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，透析，冷冻干燥，得到五种多糖，分别记为多糖GBP-1、GBP-2、GBP-3、GBP-4和GBP-5；

5)丙烯葡聚糖凝胶柱分离纯化：将多糖GBP-1溶于水，置于丙烯葡聚糖凝胶柱中，用水洗脱，收集洗脱液，采用苯酚-硫酸法对洗脱液的多糖含量进行测定，绘制洗脱曲线，合并主峰对应的流分；减压浓缩，冷冻干燥，得到精制多糖，记为GBP-1a；

所述多糖GBP-1为中性多糖，GBP-2、GBP-3、GBP-4和GBP-5为酸性多糖；

所述多糖GBP-1a为均一组分，其分子量Mw为15kDa；

所述多糖GBP-1a中葡萄糖：半乳糖：阿拉伯糖的摩尔比为4.36:73.29:1.7。

2.根据权利要求1所述蒜薹多糖的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述高压热水提取的温度为100～121℃；提取的时间为60～100min；

步骤1)中蒜薹汁与水的体积比为1：(2～5)；

步骤3)中所述pH为7，所述加热反应的条件为40～50℃反应2～3h。

3.根据权利要求1所述蒜薹多糖的制备方法，其特征在于：所述DEAE纤维素阴离子交换层析柱为DEAE-52纤维素阴离子交换柱；

所述丙烯葡聚糖凝胶柱为丙烯葡聚糖凝胶柱Sephacryl^TM200。

4.根据权利要求1所述蒜薹多糖的制备方法，其特征在于：步骤1)中所述醇沉是指向提取液中加入乙醇水溶液，乙醇水溶液为体积分数为95％的乙醇水溶液；

步骤3)中将脱蛋白的粗多糖溶于水中，所得到的溶液与双氧水的体积比为1:(2～5)；

步骤3)中所述双氧水为质量分数为30％的H₂O₂溶液；

步骤3)中脱蛋白的粗多糖与水的质量体积比为200mg:(8～15)mL。

5.根据权利要求4所述蒜薹多糖的制备方法，其特征在于：所述醇沉的条件为0～5℃下静置10～24h；

醇沉后离心，离心的转速为4500～5500rpm/min，离心的时间为10～20min。

6.根据权利要求1所述蒜薹多糖的制备方法，其特征在于：步骤2)中第一提取物与水的质量比为(0.5～1):1；第一提取物溶于水后的溶液与Sevag试剂的体积比为5:(1～2)；

步骤4)中cGBP与水的质量体积比为(150～250)mg:8mL；

步骤4)中所述透析是在截留分子量为3500Da透析袋中透析。

7.根据权利要求1所述蒜薹多糖的制备方法，其特征在于：步骤4)中所述收集洗脱液是指依次用0、0.1、0.2、0.3和0.4mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱后，根据苯酚-硫酸法绘制洗脱曲线，将洗脱曲线中洗脱峰对应的溶液合并；洗脱时，流速为0.6mL/min；

步骤3)中浓缩的温度为45～50℃；

步骤4)中所述离心的转速为5500～6500rpm/min，离心的时间为10～15min；

步骤5)中所述将GBP-1溶于水，多糖GBP-1与水的质量体积比为15～25mg：1mL；

步骤5)中所述洗脱流速为0.2mL/min。