[发明专利]与大白菜基因共分离的根肿病分子标记syau3008、引物及应用

权利要求书

1.一种与大白菜抗根肿病QS_B3.1基因共分离的分子标记syau3008，其特征在于，所述分子标记syau3008的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

2.一种权利要求1所述的分子标记syau3008的PCR特异性扩增引物，其特征在于，包括：

syau3008-F：5’-ATAAAGCGTAAGCGCCATGT-3’

syau3008-R：5’-AATGATAAATCAGATGCCGGA-3’。

3.根据权利要求1所述的分子标记syau3008在分子标记辅助选择中的应用。

4.根据权利要求1所述的分子标记syau3008在大白菜抗根肿病分子标记辅助选择中的应用。

5.根据权利要求1所述的分子标记syau3008的应用方法，其特征在于，包括：

a.提取待测材料的基因组DNA

b.PCR扩增

PCR引物的序列为：

syau3008-F：5’-ATAAAGCGTAAGCGCCATGT-3’

syau3008-R：5’-AATGATAAATCAGATGCCGGA -3’；

c.电泳：将扩增产物与等体积的上样缓冲液混合，94℃变性6min，之后在DNA测序电泳仪上进行6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，70W条件下电泳2小时，电泳结束后，进行银染，并观察扩增结果；

d.判断：如果扩增出条带的核苷酸序列为SEQ ID NO.1，则为抗病个体，其含抗根肿病QS_B3.1基因的概率为100％；如扩增出条带的核苷酸序列为SEQ ID NO.2，则为感病个体。

6.根据权利要求5所述的分子标记syau3008的应用方法，其特征在于，PCR扩增体系如下：

15ng模板DNA，5pmol/L正向引物，5pmol/L反向引物，5μl 2×Taq PCR StaMix，ddH₂O补全到10μl，4℃、2200rpm离心20s，加入10μl Mineral oil再离心一次。

7.根据权利要求6所述的分子标记syau3008的应用方法，其特征在于，PCR扩增程序如下：

95℃预变性5min；95℃变性30s，58s℃复性45s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸10min；4℃保存。