[发明专利]一种用于检测CALR基因突变的试剂和试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测CALR基因突变的试剂，其特征在于，包括：用于实时荧光PCR检测CALR基因的特异性引物对和特异性探针，以及CLAMP核酸序列；

所述特异性引物对能够特异性的扩增所述CALR基因，并且，扩增靶标片段包含CALR基因的突变区域；

所述CLAMP核酸序列为3’端具有磷酸化修饰的单链寡核苷酸序列，CLAMP核酸序列互补结合于所述CALR基因的其中一条DNA链，CLAMP核酸序列互补结合的区域覆盖所述特异性引物对的其中一条引物的3’端，同时覆盖所述CALR基因的突变区域；并且，所述CLAMP核酸序列仅与所述CALR基因的野生型基因完全互补；

所述CLAMP核酸序列、所述特异性探针，以及被CLAMP核酸序列互补结合的区域覆盖3’端的引物，三者分别互补结合于所述CALR基因相同的DNA链上。

2.根据权利要求1所述的用于检测CALR基因突变的试剂，其特征在于，所述突变区域包括所述CALR基因的7种基因突变中的至少一种；

优选的，所述CALR基因的7种基因突变，具体为CALR基因突变类型1、3、5、6、12、13和14。

3.根据权利要求1所述的用于检测CALR基因突变的试剂，其特征在于，所述CLAMP核酸序列为Seq ID No.7所示序列；

Seq ID No.7：5’-GACGAGGAGCAGAGGCTTAAGGAGG-3’。

4.根据权利要求1-3任一项所述的用于检测CALR基因突变的试剂，其特征在于，所述特异性引物对的上游引物为Seq ID No.1所示序列，下游引物为Seq ID No.2所示序列，所述特异性探针为Seq ID No.3所示序列。

Seq ID No.1：5’-CAAATGAAGGACAAACAGGACGA-3’

Seq ID No.2：5’-GGGACATCTTCCTCCTCATCTTC-3’

Seq ID No.3：5’-TGTCCTCCTCATCCTCCTCATCCTCATC-3’；

所述特异性探针的5’端具有荧光基团修饰，3’端具有荧光淬灭基团修饰。

5.根据权利要求4所述的用于检测CALR基因突变的试剂，其特征在于，所述CLAMP核酸序列互补结合的区域覆盖所述特异性引物对的上游引物的3’端。

6.一种用于检测CALR基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1-5任一项所述的用于检测CALR基因突变的试剂。

7.根据权利要求6所述的用于检测CALR基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于CALR基因实时荧光PCR检测的内标特异性引物对和内标特异性探针。

8.根据权利要求7所述的用于检测CALR基因突变的试剂盒，其特征在于，所述内标特异性引物对的上游引物为Seq ID No.4所示序列，下游引物为Seq ID No.5所示序列，所述内标特异性探针为Seq ID No.6所示序列；

Seq ID No.4：5’-CACTGGGTCCAGCGAGAAG-3’

Seq ID No.5：5’-TCTTCCAGAAGCCCTTCAGC-3’

Seq ID No.6：5’-CCAGTAGCATCTGACTTTGAGCCTCAGGGT-3’；

并且，用于CALR基因检测的内标特异性探针和用于CALR基因检测的特异性探针，两者的5’端采用不同的荧光基团修饰；

优选的，用于CALR基因检测的内标特异性探针的5’端采用HEX荧光基团修饰，3’端采用BHQ1荧光淬灭基团修饰；用于CALR基因检测的特异性探针的5’端采用FAM荧光基团修饰，3’端采用BHQ1荧光淬灭基团修饰。

9.根据权利要求6所述的用于检测CALR基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于实时荧光PCR反应的试剂。

10.根据权利要求6-9任一项所述的用于检测CALR基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的实时荧光PCR扩增程序为，95℃预变性10分钟，然后进入45个循环：95℃变性15秒、60℃退火与延伸60秒，在退火与延伸时进行荧光收集。