[发明专利]神经母细胞miR-200b/c高表达的慢病毒表达载体及其构建方法

说明书

本发明公开了一种神经母细胞miR‑200b/c高表达的慢病毒表达载体，包括：PCDH‑copGFP载体及miR200b/c基因序列，所述miR200b/c基因序列酶切插入PCDH‑copGFP载体中得到miR200b/c高表达的慢病毒表达载体，所述PCDH‑copGFP载体和miR200b/c的前体DNA序列均包含BamHl和EcoRI两个酶切位点,根据本发明实施例提供的神经母细胞miR‑200b/c高表达的慢病毒表达载体及构建方法，利用miR200b/c基因序列酶切插入PCDH‑copGFP载体中得到miR200b/c高表达的慢病毒表达载体，其转染效率高，可在神经母细胞中稳定地抑制miRNA‑200b/c表达，进而对基因表达起到调控作用。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种神经母细胞miR-200b/c高表达的慢病毒表达载体及其构建方法。

背景技术

神经母细胞瘤是儿童最常见的颅外肿瘤，是婴幼儿最常见的肿瘤。有将近一半的神经母细胞瘤发生在2岁以内的婴幼儿。神经母细胞瘤约占6-10％的儿童肿瘤，15％的儿童肿瘤死亡率。神经母细胞瘤属于神经内分泌性肿瘤，可以起源于交感神经系统的任意神经脊部位。其最常见的发生部位是肾上腺，但也可以发生在颈部、胸部、腹部以及盆腔的神经组织。

miRNA是一类进化保守的内源性的非编码小分子，普遍存在于多样性生物体内参与基因调控。miRNA主要调控着编码蛋白的基因表达，其作用机制是降解与其互补结合的mRNA或抑制不完全配对的mRNA翻译，具有非常重要的生物学作用。

miR-200a具有靶向调控转录因子活化蛋白(AP)-2γ表达而抑制神经母细胞瘤细胞增殖的能力，通过调节miRNA-200b/c表达，可能在制备治疗miRNA-200b/c表达异常相关疾病药物的开发中起到作用，但现有技术尚可稳定低表达miRNA-200b/c的重组载体。因此，提供一种神经母细胞miR-200b/c高表达的慢病毒表达载体及其构建方法具有重要意义。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的目的在于提出一种神经母细胞miR-200b/c高表达的慢病毒表达载体及其构建方法。

为实现上述目的，一方面，根据本发明实施例的神经母细胞miR-200b/c高表达的慢病毒表达载体，包括：

PCDH-copGFP载体及miR200b/c基因序列，所述miR200b/c基因序列酶切插入PCDH-copGFP载体中得到miR200b/c高表达的慢病毒表达载体，所述PCDH-copGFP载体和miR200b/c的前体DNA序列均包含BamHl和EcoRI两个酶切位点。

根据本发明的一个实施例，所述miR200b/c基因序列为前体pre-miRNA；

miR200b的基因系列位置156055681—156055750，其长度为511bp，序列如下：