[发明专利]MrgD免疫抗原片段、MrgD抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及抗体制备及其应用领域，具体是涉及单克隆抗体的制备及其应用于免疫荧光方面。此种抗体可与大鼠Mas相关性G蛋白耦联受体D(MrgD)结合，且具有良好的特异性，结合免疫荧光法，可快速检测心脏病理生理条件下MrgD表达水平的变化，对病理的发生发展过程提供可靠的依据。

技术领域

本发明涉及MrgD免疫抗原片段、MrgD抗体及其制备方法和应用，属于生物医药领域。

背景技术

高血压疾病逐年增加，其危害主要为靶器官损伤，包括心血管重构、脑卒中、肾衰、眼部疾病等。高血压的调控主要有激素调节和神经调控，前者主要为肾素-血管紧张素系统(RAS)，后者为交感副交感调控。研究发现，Mas相关性G蛋白耦联受体D(MrgD)是肾素-血管紧张素系统调控的主要受体，在肾素-血管紧张素系统调控中起到重要作用。但MrgD的体内分布以及作用机制尚未明确，因此，如果能发明一种方法，可以快速测定MrgD在体内的分布情况，对于高血压的调控有着重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种大鼠Mas相关性G蛋白耦联受体D(MrgD)免疫抗原片段，可用于制作MrgD抗体，MrgD抗体可用于MrgD免疫荧光示踪。

本发明采取的技术方案为：一种MrgD免疫抗原片段，其序列为：Ser Ser Pro AlaPro Gly Leu Thr Ile Ser Pro Thr Met Asp Cys。

本发明还公开了一种MrgD抗体，为上述的MrgD免疫片段注入动物体内后产生的抗体。

优选的，所述抗体为兔抗MrgD抗体。

本发明还公开了一种MrgD抗体的制备方法，其步骤包括：

(1)合成多肽片段Ser Ser Pro Ala Pro Gly Leu Thr Ile Ser Pro Thr MetAsp Cys；

(2)将步骤(1)合成的多肽片段注入动物体内进行免疫，

(3)取免疫后的动物脾脏，制成脾细胞，将脾细胞与骨髓瘤细胞融合后进行培养；

(4)取融合培养细胞，用包被MrgD蛋白的间接ELISA法筛选出滴度最高且为单克隆的细胞株进行扩大培养；

(5)将扩大培养的杂交杂交瘤细胞注入同种动物体内，收集腹水，离心取上清液；

(6)腹水上清液通过蛋白G微球柱,洗脱纯化后获得MrgD抗体。

本发明还公开了MrgD抗体在免疫荧光法检测MrgD体内分布状况中的应用。

优选的，其步骤包括：

(1)提取大鼠原代心肌细胞，在培养基中进行培养；

(2)弃去培养基，对心肌细胞进行清洗、固定、封闭处理后，加入上述的MrgD抗体过夜；

(3)PBS清洗后，加入荧光二抗cy3孵育，洗脱荧光二抗，加入抗荧光淬灭剂后封片拍照。

本发明提供了MrgD的特异性免疫抗原片段，将该片段注入动物体内，可产生MrgD抗体，MrgD抗体可与MrgD蛋白结合，具有良好的特异性，结合免疫荧光法，可快速检测心脏病理下MrgD表达水平的变化，为高血压病理的发生发展提供理论依据。

附图说明

图1：实施例2中正常的大鼠心肌细胞中MrgD分布示意图；

图2：实施例3中血管紧张素II诱导心肌肥大的大鼠心肌细胞中MrgD分布示意图。

具体实施方式