[发明专利]一种9羟基雄烯二酮的制备方法

说明书

本发明涉及一种9羟基雄烯二酮的制备方法，包括如下步骤，1)将植物甾醇、二氯甲烷和四甲基哌啶氮氧化物混合，搅拌，得到原料体系；控制温度为10‑20℃，将溴化钠和碳酸氢钠混合物水溶液滴加到上述原料体系中，滴加完毕后，滴加次氯酸钠溶液，反应完全后，终止反应，处理，得到植物甾醇中间体；所述植物甾醇为菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇或β‑谷甾醇，2)将植物甾醇中间体在耻垢分枝杆菌Mycobacterium smegmatis作用下进行生物转化，得到9羟基雄烯二酮，耻垢分枝杆菌的保藏编号为CCTCC NO:M2013544；本发明能加快生物转化速度，提高经济效益。

技术领域

本发明属于甾体激素药物制备技术领域，具体涉及一种9羟基雄烯二酮的制备方法。

背景技术

植物甾醇中间体的结构式为：

其是通过植物甾醇氧化得到，植物甾醇为常用的甾体激素的原料，植物甾醇中间体为多种甾体激素的关键中间体，包括雄烯二酮等等，因此一种简单，收率高纯度好的植物甾醇中间体制备方法为研究者需要解决的问题。

目前的植物甾醇中间体的制备方法中，一般采用植物甾醇为起始原料，异丙醇铝为氧化剂，在甲苯或二甲苯溶剂中，在丙酮存在下，于80℃左右，反应得到。反应温度较高，收率为80％左右。这种方法需要高温，会产生焦油，后处理麻烦。

专利申请号为201310628652.5的专利公开了一种9-OH-AD的制备方法，其采用耻垢分枝杆菌直接发酵植物甾醇得到。发酵时间较长，一般需要5天左右才能反应完全，发酵速度较慢，导致成本较高。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种9羟基雄烯二酮的制备方法，加快生物转化速度，提高经济效益。

本发明的内容为一种9羟基雄烯二酮的制备方法，包括如下步骤，

1)将植物甾醇、二氯甲烷和四甲基哌啶氮氧化物混合，搅拌，得到原料体系；控制温度为10-20℃，将溴化钠和碳酸氢钠混合物水溶液滴加到上述原料体系中，滴加完毕后，滴加次氯酸钠溶液，反应完全后，终止反应，处理，得到植物甾醇中间体；所述植物甾醇为菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇或β-谷甾醇，植物甾醇中间体的结构式为：

R为

2)将植物甾醇中间体在耻垢分枝杆菌Mycobacterium smegmatis作用下进行生物转化，得到9羟基雄烯二酮，耻垢分枝杆菌Mycobacterium smegmatis的保藏编号为CCTCCNO:M2013544。

具体的反应路线为：

起始原料为菜籽甾醇、菜油甾醇、豆甾醇或β-谷甾醇。

植物甾醇和二氯甲烷的重量体积比为1g:(3-4)ml。植物甾醇和四甲基哌啶氮氧化物的重量比为1:0.01。

溴化钠和碳酸氢钠混合物水溶液中，溴化钠的重量浓度为10％，碳酸氢钠的重量浓度为3％。

次氯酸钠溶液的浓度为10％。

植物甾醇和次氯酸钠溶液的重量比为1:3。

终止反应的方式为，加入硫代硫酸钠水溶液。

植物甾醇中间体在耻垢分枝杆菌Mycobacterium smegmatis作用下进行生物转化的步骤为，将耻垢分枝杆菌接种到转化培养基中，转化完全后，处理，得到9羟基雄烯二酮；所述转化培养基重量配方为，植物甾醇中间体2-4％，大豆油15-20％，玉米浆5-8％，硝酸钠5-6％，磷酸氢二铵0.05-0.08％，pH为8。