[发明专利]用于检测肺炎支原体的引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.用于检测肺炎支原体的引物组，其特征在于，其包括MP外引物对、MP内引物对、MP环引物对，所述MP外引物对的序列如SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2所示，所述MP内引物对如SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 4所示，所述MP环引物对如SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 6所示。

2.一种用于检测肺炎支原体的试剂盒，其包括反应体系，其特征在于，所述反应体系包括如权利要求1所述的引物组。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述反应体系还包含dNTP、Bst DNA聚合酶、Tris-HCl、KCl、(NH₄)₂SO₄、Triton X-100、甜菜碱、Mg²⁺以及荧光染料。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述反应体系包含：

0.125-5 mmol/L dNTP；

0.15-2 U/μL Bst DNA聚合酶；

10-100 mmol/L pH为7-9的Tris-HCl；

10-100 mmol/L KCl；

10-100 mmol/L (NH₄)₂SO₄；

0.1-1% Triton X-100；

0.5-1.5 mol/L 甜菜碱；

2-9 mmol/L Mg²⁺；

0.15-0.3 μmol/L MP外引物对；

0.8-2.0 μmol/L MP内引物对；以及

0.15-0.6 μmol/L MP环引物对。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述Mg²⁺来自MgSO₄或MgCl₂。

6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光染料为SYBR Green、EvaGreen、SYTO-9以及SYTO-82中的任意一种。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述反应体系包含：

1.0 mmol/L dNTP；

0.5 U/μL Bst DNA聚合酶；

20mmol/L pH为8.8的Tris-HCl；

10mmol/L KCl；

10mmol/L (NH₄)₂SO₄；

0.1% Triton X-100；

100×稀释的SYBR Green；

0.5 mol/L 甜菜碱；

6 mmol/L MgSO₄；

0.2 μmol/L MP外引物对；

1.6 μmol/L MP内引物对；以及

0.4 μmol/L MP环引物对。

8.如权利要求2至7任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒为冻干粉的形式。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，制备所述冻干粉所用保护剂为5%~20%质量体积比的蔗糖或海藻糖。

10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述保护剂为10%质量体积比的海藻糖。

11.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述冻干粉的冻干工艺为：将所述反应体系以15~30uL分装至反应管中并置于超低温冻干机中，先将温度降至-40℃以下，抽真空，20~30小时后升华抽除水分，直到在管底形成小块状干粉，真空状态下盖盖，得到冻干后的干粉试剂管，取出后，于2~8℃冷藏保存。

12.如权利要求1所述的引物组或如权利要求2~11任一项所述的试剂盒在制备用于诊断肺炎支原体的产品中的应用。