[发明专利]细胞周期检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.细胞周期检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒至少包含磷酸化组蛋白H3检测试剂和核酸荧光染料。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含BrdU溶液及其对应的荧光标记抗体溶液。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磷酸化组蛋白H3检测试剂为抗磷酸化组蛋白H3抗体，优选p-H3-Alexa Fluro 647；和/或所述核酸荧光染料选自DAPI、PI、Hoechst。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，BrdU对应的荧光标记抗体为抗BrdU-FITC。

5.根据权利要求1-4任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包含细胞固定剂和细胞破膜剂。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述细胞固定剂为2％-4％多聚甲醛；和/或所述细胞破膜剂中含有Triton X-100。

7.权利要求1-6任一项所述试剂盒在细胞周期检测中的应用，所述应用为非诊断目的。

8.非诊断目的细胞周期检测方法，其特征在于，包括：

(1)将细胞接种到含有BrdU的细胞培养基中进行培养；

(2)收获细胞，洗涤后，用细胞固定剂固定细胞；

(3)固定后的细胞用细胞破膜剂处理；

(4)将破膜处理后的细胞与磷酸化组蛋白H3检测试剂和BrdU对应的荧光标记抗体共同孵育；

(5)洗涤并重悬细胞，加入核酸荧光染料进行染色，染色后洗涤细胞，将细胞重悬后进行流式细胞检测；

其中，细胞固定剂、细胞破膜剂、磷酸化组蛋白H3检测试剂、BrdU对应的荧光标记抗体和核酸荧光染料来自权利要求5-7任一项所述试剂盒。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，包括：

1)将细胞接种到BrdU浓度为1-10μg/mL的细胞培养基中培养0.5-4小时；

2)收获细胞，PBS洗涤后，用2-4％多聚甲醛室温下固定细胞10-30分钟，用洗涤液洗涤去除多聚甲醛；

3)固定后的细胞用细胞破膜剂在室温下处理细胞10-30分钟，然后用洗涤液洗涤去除破膜剂；

4)向破膜处理后的细胞中加入终浓度为1-10μg/mL的p-H3-Alexa Fluro 647和1-10μl/mL抗BrdU-FITC，0-4℃染色细胞20-30分钟后，用洗涤液洗涤细胞；

5)将细胞重悬于洗涤液中，加入DAPI使其终浓度为0.1-1μg/mL，室温下染色10-20分钟后，洗涤细胞并将细胞重悬于PBS中，进行流式细胞检测；

2)～5)中所用洗涤液为含10％FCS或FBS的PBS；

3)中所用细胞破膜剂为：PBS+10％FCS或FBS+0.1％Triton X-100。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述细胞为哺乳动物体细胞。